W: برادر، رونویسی معکوس کامل شد، و در نهایت آخرین مرحله - فلورسنت کمی PCR!سلام، برادر، PCR کمی واقعی چیست؟
M:PCR شما همیشه می دانید، درست است؟
W: می دانید، PCR واکنش زنجیره ای پلیمراز است، و این یک فناوری است که DNA را افزایش می دهد!
M: تقریباً... این یک روش فنی برای تقویت توالی هدف به بیش از یک میلیون بار از طریق پرایمرهای خاص است، اما این فقط وجود یا عدم وجود دنباله هدف را نشان می دهد و نمی تواند مقدار الگوی اولیه را تعیین کند.فلورسانس کمی PCR یک روش فنی توسعه یافته برای حل این مشکل است.PCR زمان واقعی و PCR کمی (qPCR) به طور کلی به آن اشاره دارد.
W: تفاوت با PCR معمولی در تعیین کمیت فلورسانس نهفته است؟
M: بله، یعنی در مرحله گسترش هر سیکل PCR، شدت سیگنال فلورسانس تشخیص داده می شود و مقدار اولیه قالب را می توان با توجه به تغییر شدت سیگنال محاسبه کرد.
W: خیلی پیچیده به نظر می رسد!آیا من باید این را خودم محاسبه کنم؟
م: این مستلزم این است که شما به آرامی یاد بگیرید، بهتر است بتوانید اصل را درک کنید.اکنون می‌توانید ابتدا روی مقدار CT تمرکز کنید، که داده‌های تجربی نسبتاً بصری است و اندازه آن با اندازه مقدار قالب اولیه مطابقت دارد.همچنین نمودارهایی مانند منحنی های تقویت و منحنی های ذوب وجود دارد.آنها در مورد موفقیت یا عدم موفقیت آزمایش شما حرف آخر را می زنند.
W: اوه، برادر.سپس من می خواهم آزمایش qPCR را انجام دهم!
M: توجه ویژه ای داشته باشید که قالب ها را به منطقه معرف اضافه نکنید، در غیر این صورت مخلوط استفاده نشده شما به راحتی آلوده می شود!
W: فهمیدم!

کیت Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I

راندمان بالاتر، ویژگی بیشتر
حساسیت بالا، سازگاری خوب