رهبری

RNA غیر کد کننده طولانی، lncRNA یک RNA غیر کد کننده با طول بیشتر از 200 نوکلئوتید است که معمولاً بین 200-100000 nt است.lncRNA بیان ژن را در سطوح اپی ژنتیک، رونویسی و پس از رونویسی تنظیم می‌کند و در خاموش کردن کروموزوم X، نقش‌بندی ژنوم و اصلاح کروماتین، فعال‌سازی رونویسی، تداخل رونویسی، حمل‌ونقل هسته‌ای، تنظیم چرخه سلولی، تمایز سلولی، و بسیاری از اثرات جبران‌کننده دوز، تنظیم‌کننده‌های مهم مربوط به توسعه سلولی هستند، شرکت می‌کند. و پیشگیری از بیماری های انسانی و در حال حاضر یکی از نقاط داغ در زمینه زیست پزشکی هستند.

01  انواع و ویژگی های LncRNA

همانطور که در شکل بالا نشان داده شده است، lncRNA با توجه به منابع مختلف تشکیل آن به انواع مختلفی تقسیم می شود.دارای ویژگی های زیر است:

1. lncRNA ها معمولا طولانی تر هستند، با بیان پویا و روش های مختلف پیوند در طول تمایز
2. در مقایسه با ژن های کد کننده، lncRNA معمولا سطح بیان پایین تری دارد
3. بیشتر lncRNA ها دارای ویژگی بیان زمانی و مکانی آشکار در فرآیند تمایز و توسعه بافت هستند.
4. عبارات مشخصه ای در تومورها و سایر بیماری ها وجود دارد
5. مکان های درون سلولی lncRNA متنوع هستند
6. توالی از نظر حفاظت کم است، اما تابع درجه خاصی از حفاظت و غیره دارد.

02 سوالات متداول در مورد رونویسی معکوس LncRNA

به دلیل محتوای کم lncRNA در سلول ها، طول طولانی و ساختار سطح بالا، چنین RNA اغلب دارای ساختارهای پیچیده ای مانند حلقه های ساقه یا سنجاق سر است و RT-qPCR مستعد مشکلات رونویسی معکوس ناموفق یا بازده پایین است.

03 محلول رونویسی معکوس LncRNA

در قاعده مرکزی، فرآیند ویروس‌های RNA که از رونویسی معکوس خود برای سنتز DNA با استفاده از RNA به عنوان الگو استفاده می‌کنند، رونویسی معکوس نامیده می‌شود.فرآیند استفاده از رونوشت معکوس ویروس RNA برای سنتز الگوی cDNA در شرایط آزمایشگاهی، رونویسی معکوس نامیده می شود.عناصر اصلی موجود در سیستم رونویسی معکوس: الگوی RNA، رونوشت معکوس، آغازگرها و سایر اجزاء.

1. الگوی RNA

تأثیر الگوی RNA بر رونویسی معکوس در ساختار، خلوص و یکپارچگی آن منعکس می شود.هرچه خلوص و یکپارچگی RNA استخراج شده بیشتر باشد، بازده رونویسی معکوس بالاتر و نتایج کمی بعدی دقیق تر است.RNA خالص شده توسط معرف‌های استخراج RNA معمولاً حاوی بقایای نمک‌های الکل و گوانیدین است که اثر مهاری قوی بر روی اکثر ترانس کریپتاز معکوس دارند.

2. ترانس کریپتاز معکوس

رونویسی معکوس تأثیر کلیدی در کل سیستم رونویسی معکوس دارد.دمای مناسب برای ترانس کریپتاز معکوس مورد استفاده در اکثر آزمایشگاه ها به طور کلی 42 درجه سانتی گراد است.در واقع، باز شدن ساختار RNA سطح بالا به دمای بالاتری نیاز دارد و نیاز به ترانس کریپتاز معکوس بالاتر است.

3.آغازگر

آغازگرهای رونویسی معکوس شامل پرایمرهای اختصاصی ژن، پرایمرهای تصادفی و پرایمرهای Oligo dT هستند.اکثر lncRNA ها حاوی دم های polyA نیستند و تطبیق مناسب پرایمرهای تصادفی با Oligo dT مهم است.

4. سایر اجزا

با توجه به این واقعیت که تجزیه RNA به ویژه آسان است، ورود اجزاء در سیستم رونویسی معکوس را می توان به حداقل رساند که می تواند به طور موثر از ورود RNase جلوگیری کند و پیشرفت روان رونویسی معکوس را تضمین کند.

Foregeneاز الگوی RNA، رونویسی معکوس به qPCR به دست می آید

شناسایی lncRNA خود را به طور کامل همراهی کنید

RNA کل جانوران Iتسلیکیت (با ستون حذف gDNA)

RNA کل سلول Iتسلیکیت (با ستون حذف gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (با gDNase) (پرمیکس فوق العاده برای سنتز cDNA رشته اول از lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aمزایا ofاستخراج RNA:

این کیت از فناوری استخراج RNA نسل سوم استفاده می کند، بدون نیاز به استفاده از DNase.

11 دقیقه از سلول‌های کشت‌شده با صفحه 96، 24، 12 و 6 چاهک، استخراج با کارایی بالا RNA سلولی بدون gDNA، با خلوص بالا و با کیفیت بالا.

مزایای رونویسی معکوس lncRNA:

یک سیستم رونویسی معکوس که مخصوص LncRNA است تا به سرعت آلودگی DNA ژنومی را حذف کند.

سیستم رونویسی معکوس پایداری حرارتی بالایی دارد و همچنان عملکرد رونویسی معکوس خوبی در دمای 50 درجه سانتی گراد دارد.

الگوهای با محتوای GC بالا و ساختار ثانویه پیچیده را می توان با کارایی بالا معکوس کرد.

مزایایof qPCR:

شروع داغ Foregene Taq Polymerase دارای راندمان تقویت بالاتر، حساسیت تقویت بالاتر و ویژگی تقویت بالاتر است.

Real PCR Easy Mix بهینه سازی شده باعث می شود SYBR Green I از حساسیت تشخیص بالاتری برخوردار باشد و شدت فلورسانس آن 3-5 برابر محصولات مشابه است که می تواند نیازهای انواع مختلف آزمایشات کمی فلورسانس را برآورده کند.