راهنمای تجزیه و تحلیل مسئله

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

عملکرد کم یا بدون DNA

معمولاً عوامل زیادی بر بازده DNA ژنومی تأثیر می‌گذارند، از جمله منبع نمونه، سن نمونه، شرایط نگهداری نمونه و عملیات.

DNA ژنومی را نمی توان در طول استخراج به دست آورد

1. نمونه های بافت به طور نامناسب ذخیره می شوند یا برای مدت طولانی ذخیره می شوند که منجر به تخریب DNA ژنومی می شود.

توصیه: نمونه های بافت را در نیتروژن مایع یا 20- نگهداری کنید°جسعی کنید از نمونه های تازه جمع آوری شده برای استخراج DNA ژنومی استفاده کنید.

2. مقدار بسیار کم نمونه ممکن است باعث شود DNA ژنومی مربوطه استخراج نشود.

پیشنهاد: برای نمونه‌های بافتی که برای مدت طولانی ذخیره شده‌اند یا دارای تخریب شدید DNA ژنومی هستند، می‌توان مقدار نمونه‌های بافت را به‌طور مناسب افزایش داد تا DNA ژنومی قابل‌توجهی استخراج شود.مقدار نمونه را می توان با توجه به نیاز DNA تعیین کرد، اما نمونه تازه نباید بیش از 100 میلی گرم و نمونه خشک نباید بیش از 30 میلی گرم باشد.

3. نمونه با نیتروژن مایع آسیاب نمی شود یا برای مدت طولانی بعد از نیتروژن مایع قرار نمی گیرد.

پیشنهاد: در طول استخراج DNA، نمونه باید به طور کامل با نیتروژن مایع آسیاب شود تا دیواره سلولی شکسته شود.پس از آسیاب، لطفاً پودر نمونه را به PL1 که از قبل در 65 گرم شده است، منتقل کنید°C در اسرع وقت (هنگامی که پودر آسیاب شده ذوب شود، DNA ژنومی به سرعت شروع به تخریب می کند).

4. ذخیره سازی نامناسب Foregene Protease منجر به کاهش یا غیرفعال شدن فعالیت می شود.

توصیه: شرایط نگهداری Foregene Protease را تأیید کنید یا آن را با یک Foregene Protease جدید برای هیدرولیز آنزیمی جایگزین کنید.

5. کیت به طور نامناسب ذخیره شده یا برای مدت طولانی نگهداری می شود و باعث از کار افتادن برخی از اجزای کیت می شود.

توصیه: یک کیت جدید استخراج DNA ژنومی گیاهی برای عملیات مربوطه خریداری کنید.

6. استفاده نادرست از کیت.

پیشنهاد: یک کیت جداسازی DNA گیاهی که به نمونه هایی برای استخراج و خالص سازی DNA ژنومی گیاه اختصاص داده شده است، خریداری کنید.

7. بافر WB بدون اضافه کردن anhydrous اتانول

توصیه: مطمئن شوید که حجم صحیح اتانول مطلق را به Buffer WB اضافه کنید.

8. مایع شوینده به درستی روی غشای سیلیسی چکه نشده است.

پیشنهاد: شوینده از قبل گرم شده را در 65 اضافه کنید℃به صورت قطره ای تا وسط غشای سیلیکاژل، آن را به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق بگذارید تا راندمان شستشو افزایش یابد.

استخراج برای به دست آوردن DNA ژنومی کم بازده

1. نمونه به طور نامناسب ذخیره شده یا برای مدت طولانی ذخیره می شود و در نتیجه DNA ژنومی تخریب می شود.

توصیه: نمونه های بافت را در 20- نگهداری کنید℃;سعی کنید از نمونه های بافت تازه جمع آوری شده برای استخراج DNA ژنومی استفاده کنید.

2. اگر مقدار نمونه های بافت خیلی کم باشد، DNA ژنومی استخراج شده کمتر خواهد بود.

پیشنهاد: برخی از نمونه های گیاهی غنی از آب هستند، مانند گیاهان آبزی مانند جلبک ها و غیره، می توان دوز را به طور مناسب افزایش داد و یا آب را قبل از عمل کمی کم آب کرد.

3. نمونه ها به طور کامل با نیتروژن مایع آسیاب نشدند یا پس از آسیاب برای مدت طولانی در دمای اتاق قرار گرفتند.

پیشنهاد: آسیاب نیتروژن مایع باید کافی باشد و دیواره سلولی نمونه باید تا حد امکان شکسته شود.بلافاصله پس از آسیاب، پودر نمونه باید به 65 منتقل شود℃بافر PL1 از قبل گرم شده برای مرحله بعدی.

4. عدم استفاده از کیت صحیح.

توصیه: از کیت اختصاصی جداسازی DNA گیاهی برای استخراج و خالص سازی DNA ژنومی گیاه استفاده کنید.

5. ذخیره سازی نامناسب Foregene Protease منجر به کاهش یا غیرفعال شدن فعالیت می شود.

توصیه: شرایط نگهداری Foregene Protease را تأیید کنید یا آن را با یک Foregene Protease جدید برای هیدرولیز آنزیمی جایگزین کنید.

6. مشکل شوینده

توصیه: لطفاً از بافر EB برای شستشو استفاده کنید.در صورت استفاده از ddH₂O یا سایر مواد شوینده، مطمئن شوید که pH مایع شوینده بین 7.0-8.5 باشد.

7. مایع شوینده به درستی چکه نمی شود

پیشنهاد: لطفا قطره شستشو را به وسط غشای سیلیس اضافه کنید و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق بگذارید تا راندمان شستشو افزایش یابد.

8. حجم مایع شوینده خیلی کم است

پیشنهاد: لطفاً از شوینده برای شستشوی DNA ژنومی طبق دستورالعمل استفاده کنید، حداقل حداقل 100میکرولیتر.

استخراج DNA ژنومی با خلوص پایین

خلوص پایین DNA ژنومی منجر به شکست یا اثر ضعیف آزمایش‌های پایین‌دستی می‌شود، مانند: آنزیم را نمی‌توان برش داد و قطعه ژن هدف را نمی‌توان با PCR به دست آورد.

1. آلودگی پروتئین های متفرقه، آلودگی RNA.

تجزیه و تحلیل: بافر PW برای شستشوی ستون استفاده نشد.بافر PW برای شستشوی ستون با سرعت سانتریفیوژ صحیح استفاده نشد.

پیشنهاد: سعی کنید هنگام عبور مایع رویی از ستون، اطمینان حاصل کنید که در مایع رویی بارندگی وجود ندارد.حتما ستون تصفیه را با بافر PW طبق دستورالعمل بشویید و این مرحله قابل حذف نیست.

2. آلودگی یونی ناخالصی.

تجزیه و تحلیل: ستون شستشو بافر WB حذف شد یا فقط یک بار شسته شد که منجر به آلودگی یونی باقیمانده شد.

توصیه: حتماً طبق دستورالعمل دو بار با بافر WB بشویید تا یون های باقیمانده تا حد امکان حذف شوند.

3. آلودگی RNase.

تجزیه و تحلیل: RNase اگزوژن به بافر اضافه می شود.عملیات شستشوی نادرست در بافر PW منجر به RNase باقیمانده می شود و بر عملیات آزمایشی RNA پایین دست، مانند رونویسی آزمایشگاهی، تأثیر می گذارد.

پیشنهاد: کیت های استخراج اسید نوکلئیک سری Foregene می توانند RNA را بدون RNase اضافی حذف کنند و تمام معرف های موجود در کیت جداسازی DNA گیاهی نیازی به RNase ندارند.حتما ستون تصفیه را با بافر PW طبق دستورالعمل بشویید و این مرحله قابل حذف نیست.

4. باقی مانده های اتانول.

تجزیه و تحلیل: پس از شستشوی ستون تصفیه با بافر WB، هیچ سانتریفیوژ لوله خالی انجام نشد.

توصیه: دستورالعمل های مربوط به سانتریفیوژ مناسب لوله خالی را دنبال کنید.

کتابچه راهنمای دستور العمل:

راهنمای دستورالعمل کیت جداسازی DNA گیاهی