1- توابع بیش از 5 RNA را نام ببرید؟
انتقال RNA tRNA اسید آمینه انتقالی ریبوزوم RNA rRNA ریبوزوم RNA پیام رسان mRNA سنتز پروتئین الگوی سنتز پروتئین RNA هسته ای ناهمگن hnRNA پیش ساز mRNA بالغ RNA هسته ای کوچک snRNA دخیل در پیرایش hnRNA RNA سیتوپلاسمی کوچک scRNA/7SL-Callon-بدن مولفه سنتز مجدد و پلاکال-نشانه شده پروتئین RNA آنتی سنس anRNA/micRNA بیان ژن را تنظیم می کند RNA ریبوزیم RNA فعال آنزیمی
2. تفاوت اصلی بین پروکاریوتی و یوکاریوتی در چیست؟
Prokaryotic TTGACA --- TATAAT------Initiation Site-35 -10 Eukaryotic Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Initiation Site-110 -70 -25
3. جنبه های اصلی ساخت مصنوعی پلاسمیدهای طبیعی چیست؟
پلاسمیدهای طبیعی اغلب دارای نقص هستند، بنابراین برای استفاده به عنوان حامل برای مهندسی ژنتیک مناسب نیستند و باید اصلاح و ساخته شوند: الف.ژن‌های نشانگر انتخاب مناسب را اضافه کنید، مانند دو یا چند ژن، که برای انتخاب آسان هستند، معمولاً ژن‌های آنتی‌بیوتیک.بافزایش یا کاهش مکان های مناسب برش آنزیم برای تسهیل ترکیب مجدد.جطول را کوتاه کنید، قطعات غیر ضروری را قطع کنید، راندمان واردات را بهبود بخشید و ظرفیت بارگیری را افزایش دهید.دReplicon را از تنگ به شل، از کپی کمتر به کپی بیشتر تغییر دهید.ه.عناصر ژنتیکی ویژه را با توجه به نیازهای خاص مهندسی ژنتیک اضافه کنید
4. روشی را برای غربالگری افتراقی cDNA اختصاصی بافت مثال بزنید؟
دو جمعیت سلولی تهیه می‌شود، ژن هدف در یکی از سلول‌ها بیان می‌شود یا به شدت بیان می‌شود و ژن هدف در سلول دیگر بیان نمی‌شود یا کم بیان می‌شود و سپس با هیبریداسیون و مقایسه ژن هدف پیدا می‌شود.به عنوان مثال، در طول وقوع و توسعه تومورها، سلول های تومور mRNA هایی را با سطوح بیان متفاوتی نسبت به سلول های طبیعی ارائه می کنند.بنابراین، ژن های مرتبط با تومور را می توان با هیبریداسیون افتراقی غربال کرد.روش القایی همچنین می تواند برای غربالگری ژن هایی که بیان آنها القا شده است استفاده شود.
5. ایجاد و غربالگری رده های سلولی هیبریدوما؟
سلول‌های B طحال + سلول‌های میلوما، پلی اتیلن گلیکول (PEG) را برای تقویت همجوشی سلولی اضافه کنید و سلول‌های همجوشی B-میلوما طحال رشد کرده در محیط HAT (حاوی هیپوگزانتین، آمینوپترین، T) به رشد خود ادامه می‌دهند.همجوشی سلولی شامل: سلول های همجوشی طحال-طحال: قادر به رشد نیستند، سلول های طحال را نمی توان در شرایط آزمایشگاهی کشت داد.سلول های همجوشی استخوان و استخوان: نمی توانند از هیپوگزانتین استفاده کنند، اما می توانند پورین را از طریق مسیر دوم با استفاده از فولات ردوکتاز سنتز کنند.آمینوپترین فولات ردوکتاز را مهار می کند و بنابراین نمی تواند رشد کند.سلول های همجوشی استخوان-طحال: می توانند در HAT رشد کنند، سلول های طحال می توانند از هیپوگزانتین استفاده کنند و سلول های استخوانی عملکرد تقسیم سلولی را فراهم می کنند.
6. اصل و روش تعیین ساختار اولیه DNA به روش پایانی دی اکسی (روش سنگر) چیست؟
اصل این است که از یک پایان دهنده زنجیره نوکلئوتیدی - 2،، 3، - دی دی اکسی نوکلئوتید برای پایان دادن به گسترش DNA استفاده کنید.از آنجایی که فاقد 3-OH لازم برای تشکیل پیوندهای 3/5/فسفودی استر است، پس از اینکه در زنجیره DNA گنجانده شد، زنجیره DNA نمی تواند بیشتر گسترش یابد.طبق اصل جفت شدن بازها، هر زمان که DNA پلیمراز برای شرکت در زنجیره DNA به طور معمول توسعه یافته به dNMP نیاز داشته باشد، دو احتمال وجود دارد، یکی شرکت در ddNTP، که منجر به خاتمه گسترش زنجیره دئوکسی نوکلئوتید می شود.دیگری مشارکت در dNTP است، به طوری که زنجیره DNA همچنان می تواند تا زمانی که ddNTP بعدی گنجانده شود به گسترش خود ادامه دهد.طبق این روش می توان گروهی از قطعات DNA با طول های مختلف که به ddNTP ختم می شوند به دست آورد.روش تقسیم به چهار گروه به ترتیب ddAMP، ddGMP، ddCMP و ddTMP است.پس از واکنش، الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید می تواند توالی DNA را با توجه به نوارهای شنا بخواند.
7. اثر تنظیم مثبت پروتئین فعال کننده (CAP) بر رونویسی چیست؟
پروتئین گیرنده آدنیلات حلقوی (cAMP) CRP (پروتئین گیرنده cAMP)، مجموعه ای که از ترکیب cAMP و CRP تشکیل می شود، CAP (پروتئین cAMP فعال شده) نامیده می شود.هنگامی که E. coli در محیطی فاقد گلوکز رشد می‌کند، سنتز CAP افزایش می‌یابد و CAP وظیفه فعال‌سازی پروموترهایی مانند لاکتوز (Lac) را دارد.برخی از پروموترهای وابسته به CRP فاقد ویژگی معمول توالی ناحیه 35- (TTGACA) هستند که پروموترهای رایج دارند.بنابراین، اتصال RNA پلیمراز به آن دشوار است.وجود CAP (عملکرد): می تواند به طور قابل توجهی ثابت اتصال آنزیم و پروموتر را بهبود بخشد.این عمدتاً دو جنبه زیر را نشان می دهد: ① CAP به مولکول آنزیم کمک می کند تا با تغییر ترکیب پروموتر و برهمکنش با آنزیم به درستی جهت گیری کند تا با منطقه -10 ترکیب شود و نقش جایگزینی عملکرد ناحیه 35- را ایفا کند.②CAP همچنین می‌تواند اتصال RNA پلیمراز به سایر مکان‌های DNA را مهار کند و در نتیجه احتمال اتصال به پروموتر خاص آن را افزایش دهد.
8. معمولاً چه مراحلی در آزمایش نوترکیبی DNA معمولی گنجانده می شود؟
آ.ژن هدف (یا ژن اگزوژن) ارگانیسم دهنده را استخراج کرده و آن را به صورت آنزیمی به مولکول DNA دیگری (ناقل شبیه سازی) متصل کنید تا یک مولکول DNA نوترکیب جدید تشکیل شود.بمولکول DNA نوترکیب را به سلول گیرنده منتقل کرده و تکثیر کرده و در سلول گیرنده حفظ کنید.به این فرآیند تبدیل می گویند.جغربالگری و شناسایی سلول های گیرنده که DNA نوترکیب را جذب کرده اند.دکشت انبوه سلول های حاوی DNA نوترکیب برای تشخیص اینکه آیا ژن کمک خارجی بیان شده است یا خیر.
9. ساخت کتابخانه ژن سه روش برای غربالگری نوترکیب ها ارائه شده و فرآیند به اختصار توضیح داده شده است.
غربالگری مقاومت آنتی بیوتیکی، غیرفعال سازی مقاومت درج، غربالگری نقطه آبی-سفید یا غربالگری PCR، غربالگری افتراقی، پروب DNA بیشتر ناقل های شبیه سازی حامل ژن های مقاومت آنتی بیوتیکی (ضد آمپی سیلین، تتراسایکلین) هستند.هنگامی که پلاسمید به اشریشیا کلی منتقل می شود، باکتری مقاومت پیدا می کند و آنهایی که انتقال ندارند، مقاومت نخواهند داشت.اما نمی تواند تشخیص دهد که آیا دوباره سازماندهی شده است یا نه.در یک ناقل حاوی دو ژن مقاومت، اگر یک قطعه DNA خارجی به یکی از ژن ها وارد شود و باعث غیرفعال شدن ژن شود، می توان از دو صفحه کنترل حاوی داروهای مختلف برای غربالگری نوترکیب های مثبت استفاده کرد.به عنوان مثال، پلاسمید pUC حاوی ژن LacZ (رمزکننده β-گالاکتوزیداز) است که می‌تواند سوبسترای کروموژنیک X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) را تجزیه کرده و آبی تولید کند، در نتیجه سویه را آبی می‌کند.هنگامی که DNA خارجی وارد می شود، ژن LacZ نمی تواند بیان شود و سویه سفید است تا باکتری های نوترکیب را غربال کند.
10-فرآیند اساسی بدست آوردن جانوران تراریخته از طریق سلولهای بنیادی جنینی را توضیح دهید؟
سلول های بنیادی جنینی (ES) سلول های جنینی در طول رشد جنینی هستند که می توانند به طور مصنوعی کشت و تکثیر شوند و عملکرد تمایز به انواع دیگر سلول ها را دارند.کشت سلول های ES: توده سلولی داخلی بلاستوسیست جدا شده و کشت داده می شود.هنگامی که ES در یک لایه بدون فیدر کشت می شود، به سلول های عملکردی مختلف مانند سلول های ماهیچه ای و سلول های N تمایز می یابد.هنگامی که در محیط حاوی فیبروبلاست کشت می شود، ES عملکرد تمایز را حفظ می کند.ES را می توان به صورت ژنتیکی دستکاری کرد و تابع تمایز آن را می توان بدون تأثیر بر تابع تمایز آن ادغام کرد، که مشکل ادغام تصادفی را حل می کند.ژن‌های برون‌زا را به سلول‌های بنیادی جنینی وارد کنید، سپس در رحم موش‌های ماده باردار لانه گزینی کنید، به نوزادان تبدیل شوید و موش‌های هموزیگوت به دست آورید.