معرفی:

RNA، نام علمی ریبونوکلئیک اسید، مخفف آن از RiboNucleic Acid می آید، نوعی اسید نوکلئیک است که از اتصال حداقل ده ها ریبونوکلئوتید از طریق پیوندهای فسفودی استر تشکیل می شود.

فرض کاوش RNA استخراج RNA توتال عاری از آلودگی است و اصل اساسی استخراج RNA را می توان تقریباً به صورت زیر خلاصه کرد:

1. ابتدا سلول ها را مختل کنید

2. سپس ناخالصی های ماکرومولکولی (پروتئین ها، لیپیدها، DNA و غیره) را حذف کنید.

3. در نهایت، RNA با حذف نمک ها و حلال های آلی و خالص سازی بیشتر RNA رسوب می شود.

گذشته و حال روش استخراج

اولین نسل از روش استخراج RNA روش رسوب TRIZol (مواد مورد استفاده شامل گوانیدین ایزوتیوسیانات، فنل، کلروفرم و غیره) است که توسط پدربزرگی به نام پیوتر چامچینسکی و مادربزرگ نیکولتا ساچی اختراع شد، زیرا این اختراع امکان استخراج RNA را سریع و آسان می‌دهد.

بعدها پدربزرگ این پتنت را به Invitrogen فروخت و Invitrogen این روش را به دنیا معرفی کرد و تبدیل به روشی پرکاربرد شد.

بعداً اینویتروژن توسط ترمو خریداری شد!

محصول نماینده: معرف TRIZol اینویتروژن

با این حال، روش رسوب TRIZol نیاز به ته نشینی و استخراج چندگانه RNA دارد و معرف های مورد استفاده سمی هستند و زمان زیادی برای کار کردن نیاز دارند.

بنابراین، نسل دوم روش خالص سازی ستون-آنزیم با استفاده از غشای سیلیکاژل به عنوان ماده جذب اسید نوکلئیک خاص برای به حداکثر رساندن بازیابی RNA در نمونه در حالی که سایر ناخالصی ها را حذف می کند، به وجود آمد.

روش نسل دوم عملیات را بر اساس عملکرد پایدار ساده می کند، عامل خطر را کاهش می دهد و کارایی استخراج RNA را بهبود می بخشد.

محصولات نمایندگی: QIAGEN RNeasy و اکثر محصولات داخلی

با این حال، هر دو روش نسل اول و دوم نیاز به استفاده از DNase برای حذف آلودگی DNA دارند، که برای آزمایش‌های پایین دست بعدی ناراحتی ایجاد می‌کند.DNase باقیمانده کارایی رونویسی معکوس را کاهش می دهد و سنتز cDNA رشته اول را کاهش می دهد و در نتیجه بر دقت نتایج تأثیر می گذارد.

بنابراین، روش استخراج نسل سوم بر اساس نسل دوم بهینه شده است.آزمایش نیازی به افزودن هیچ آنزیمی ندارد و RNA تنها با دو ستون به راحتی بدست می آید.

ستون 1: ستون پاک کننده DNA برای پاک کردن DNA

ستون 2: ستون فقط RNA به طور خاص RNA را جذب و بازیابی می کند

چنین عملیات ساده ای نه تنها در زمان صرفه جویی می کند، بلکه عملیات آزمایش های پایین دست را نیز تسهیل می کند!

محصولات نمایندگی: QIAGEN RNeasy Plus وفورجینمحصولات سری تصفیه RNA

(RNeasy Plus)

(Foregeneکیت جداسازی RNA توتال گیاهی)

بی سر و صدا بگو!کیت RNA Foregene همچنین یک پاک کن RNase با استفاده بسیار آسان ارائه می دهد که می تواند 400 میکروگرم RNase را در عرض 1 دقیقه به طور کامل حذف کند، بدون اینکه هیچ گونه ماده سمی به بدن انسان اضافه کند!

عکس1: نمودار مقایسه فرآیند عملیاتی

محصولات Foregene می توانند استخراج RNA را تنها در دو آهنگ کامل کنند، دیگران را نسبت به پیشرفت آزمایش خود حسادت نکنید!

عکس2:Eنتایج تجربی چارت مقایسه

نسل اول (1: TRIZOL)

نسل دوم (2: RNeasy از QIAGEN)

نسل سوم (3: QIAGEN's RNeasy plus، 4: Foregene)

عکس3: گراف qPCR (گراف منحنی تقویت)

نسل اول (سبز به معنی TRIzol -، قرمز به معنی TRIzol +)

نسل دوم (آبی آسمانی به معنای QIAGEN RNeasy-، قرمز به معنای QIAGEN RNeasy +)

نسل سوم (آبی یعنی QIAGEN RNeasy plus، سبز به معنای Foregene)

(توجه: نمودار qPCR "-" نشان می دهد که DNase اضافه نشده است و آلودگی DNA حذف نشده است. بنابراین CT بالاتر است و نتیجه دقیق نیست؛ "+" نشان می دهد که DNase اضافه شده و آلودگی DNA حذف شده است، نتیجه دقیق است)

هر ارتقا فنی به این معنی است که عملیات آزمایش در جهتی ساده تر و کاربرپسندتر در حال توسعه است.

هدف Foregene کمک به محققان علمی بیشتر در صرفه جویی در زمان و هزینه آزمایش، به دست آوردن نتایج آزمایشی با کیفیت بالا و ایجاد مشترک دستاوردهای تحقیقاتی علمی ارزشمندتر است.