چقدر میدونی

درباره Nاستخراج اسید اوکلئیک

ابتدا و انتهای اسید نوکلئیک خالص شده

همه چیز در ابتدا دشوار است، اسید نوکلئیک خالص بیشترین مقدار را دارد

شروع آزمایش های مولکولی، برای آزمایش های بعدی

موفقیت یا شکست تاثیر مهمی دارد.

اسپکتروفتومتر UV Trace/ultra Trace مورد علاقه بسیاری از محققان علمی است زیرا می تواند غلظت اسید نوکلئیک و باقیمانده یون های پروتئین و نمک را به سادگی، سریع و اقتصادی تشخیص دهد.

همانطور که همه ما می دانیم، A260 به معنای مقدار جذب اسید نوکلئیک OD، A280 به معنای مقدار جذب غلظت پروتئین مقدار OD، A230 به معنای مقدار جذب غلظت یون نمک OD است، بنابراین A260 می تواند غلظت اسید نوکلئیک را تبدیل کند، A260/280 به معنای باقیمانده پروتئین، A260/230 به معنای باقیمانده یون نمک است که فقط بر اساس یک قاعده کشف شده است.مرسومباور کنیم که می تواند خلوص DNA و RNA را توضیح دهدتا حدی.این تنها استاندارد برای شناسایی عملکرد و خلوص اسید نوکلئیک نیست، فقط به عنوان مرجع استفاده می شود و یک "استاندارد طلا" نیست.

کتابچه راهنمای Thermo Fisher ND-2000 بر قابلیت اطمینان نتایج آزمایش تاکید دارد

دلیل آن این است که نتایج به‌دست‌آمده با استفاده از اسپکتروفتومتر میکرو / اولترا میکرو فرابنفش تنها نشان‌دهنده بازده و خلوص اسید نوکلئیک از طرف است و عوامل مؤثر زیادی وجود دارد (مسیر نوری، حجم نمونه، غلظت نمونه، مقدار pH، سایر یون‌هایی که بر اندازه‌گیری جذب تأثیر می‌گذارند و غیره)، لزوماً مقدار OD اندازه‌گیری شده دقیق نیست.در عین حال، به دلیل عدم اختصاصی بودن مواد تعیین مقدار جذب، DNA تک رشته ای، DNA دو رشته ای، RNA، dNTPs و برخی پروتئین ها همگی پیک جذب در طول موج 260 نانومتر دارند و غلظت تعیین شده توسط A260 به تنهایی لزوماً DNA یا RNA واقعی نیست.تمرکز، و یکپارچگی و تخریب آن قابل قضاوت نیست.

پس چگونه می توان کیفیت اسید نوکلئیک خالص شده خود را قضاوت کرد؟علاوه بر استفاده از اسپکتروفتومتر میکرو / اولترا میکروب UV برای تشخیص، روش هایی مانند الکتروفورز ژل آگارز نیز برای نمایش بصری خلوص و یکپارچگی اسید نوکلئیک و نشان دادن غلظت تا حدی مورد نیاز است.به این ترتیب، بازده و خلوص اسید نوکلئیک به دست آمده از نتایج تشخیص روش های مختلف معتبر است.

مقایسه نمودار تجربی

DNA ژنومی سلول های H1299 با استفاده از کیت های استخراج DNA شرکت A استخراج شد و آلودگی ناخالصی قابل توجهی مشاهده شد که منجر به مقادیر بالای OD شد.

(مقدار اندازه گیری OD و الکتروفروگرام مربوطه)

شاخص ارزشیابی

آیا «استاندارد طلایی» برای آزمایش عملکرد و کیفیت اسید نوکلئیک وجود دارد؟

تا آنجا که می دانیم، هیچ روش ساده، سریع و ارزانی وجود ندارد.چه اسپکتروفتومتر، چه ژل الکتروفورز یا طیف سنجی جرمی، همه آنها غلظت و خلوص اسید نوکلئیک موجود در محلول را از جنبه های مختلف منعکس می کنند و باید با مراجعه به یکدیگر قضاوت شوند.

بهترین شاخص ارزیابی همیشه استبرنامه آزمایشی بعدی.تاثیری بر کارایی رونویسی معکوس و تقویت PCR ندارد.بدست آوردن محصولات تقویتی قابل اعتماد و مقادیر Ct و بدست آوردن یک توالی کامل با تعیین توالی، استخراج موفق اسید نوکلئیک است.

به طور خلاصه، دیدگاه نظریه صرفاً نسبت باید با دیدگاه «استفاده از نتایج تجربی پایین دستی خوب به عنوان پارامترهای استخراج خوب» به چالش کشیده شود!

کیت های استخراج DNA RNA Foregene توصیه شده برای بدست آوردن خلوص DNA/RNA بالا:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/