تجزیه و تحلیل زیر از مشکلات احتمالی درباکالسواب/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

ستون تصفیه مسدود شده است

در این کیت در عملیات استخراج DNA ژنومی، ستون خالص سازی مستقیماً روی مخلوط لیز آنزیمی نمونه بدون مرحله سانتریفیوژ جذب می شود و ممکن است به دلیل آنزیم سازی ناقص و ویسکوزیته بالای نمونه، ستون تصفیه مسدود شود.

علل احتمالی زیر به شرح زیر است:

1. هضم آنزیمی ناقص نمونه های بافت.

توصیه: زمان پردازش نمونه Foregene Protease را می توان به طور مناسب افزایش داد یا مایع رویی را پس از سانتریفیوژ در 12000 دور در دقیقه (~13400) گرفت.× g) به مدت 5 دقیقه

2. استفاده بیش از حد از نمونه های بافت یا بافت های بزرگ.

توصیه: بهتر است از 1 تجاوز نکنیدباکال سواب در نمونه؛اگر نمونه خیلی بزرگ است، دوز بافر ST1، پروتئاز Foregene، بافر ST2 را بر این اساس افزایش دهید.

3. ویسکوزیته نمونه خیلی زیاد است.

توصیه: نمونه ها را می توان به طور مناسب با 10 میلی مولار Tris-HCl قبل از استخراج DNA ژنومی رقیق کرد.

4. قطعات کارت خون مکیده شده است.

توصیه: زمان سانتریفیوژ گذرا مرحله 6 استخراج ژنومی لکه خون (کارت FTA) را می توان به طور مناسب افزایش داد.

عملکرد کم یا بدون DNA

اغلب عوامل مختلفی وجود دارد که بر عملکرد DNA ژنومی تأثیر می گذارد، از جمله منشاء نمونه، شرایط نگهداری نمونه، آماده سازی نمونه، دستکاری و غیره.

DNA ژنومی را نمی توان در طول استخراج به دست آورد

علل احتمالی به شرح زیر است:

1. نگهداری نادرست نمونه ها یا نگهداری طولانی مدت منجر به تخریب DNA ژنومی می شود.

توصیه: سواب های خوراکی ترجیحاً باید تازه نمونه برداری شوند و استفاده از سواب های نگهداری شده برای عملیات استخراج DNA ژنومی توصیه نمی شود.نمونه های لکه خون باید اطمینان حاصل کنند که کیفیت آن مناسب است و زمان نگهداری نباید خیلی طولانی باشد.

2. استفاده بسیار کم از بافت ممکن است منجر به عدم استخراج DNA ژنومی مربوطه شود.

توصیه: دنبال کنیدبوکادستورالعمل‌های نمونه‌برداری سواب را در راهنمای عملیات، و تا حد امکان پاک کنید تا سلول‌های کافی برای استخراج DNA ژنومی به سواب دهانی متصل شوند.برای استخراج نمونه لکه خون، می توان ناحیه برش لکه خون را به طور مناسب افزایش داد.

3. Foregene Protease به طور نامناسب حفظ می شود و در نتیجه فعالیت آن کاهش می یابد یا غیرفعال می شود.

توصیه: شرایط نگهداری را تایید کنیدافoregene Protease یا جایگزین آن با یک Foregene Protease جدید برای واکنش آنزیمی.

4. نگهداری نادرست کیت یا زمان نگهداری بیش از حد طولانی است و در نتیجه برخی از اجزای کیت خراب می شوند.

توصیه: یک دستگاه جدید بخریدباکال سواب DNAانزوا کیت برای رویه های مرتبط

5. بافر WB اتانول مطلق اضافه نمی کند.

توصیه: تأیید کنید که بافر WB حجم صحیح اتانول مطلق را اضافه می کند.

6. ماده شوینده به درستی به فیلم سیلیکونی اضافه نشده است.

توصیه: اضافه کردن 65درجه سانتی گرادشوینده از قبل گرم شده به وسط غشای سیلیکونی می ریزد و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق می گذارد تا راندمان شستشو افزایش یابد.

LDNA ژنومی با بازده جدا شده

علل احتمالی زیر به شرح زیر است:

1. نگهداری نادرست نمونه ها یا نگهداری طولانی مدت منجر به تخریب DNA ژنومی می شود.

توصیه: سواب های خوراکی ترجیحاً تازه نمونه برداری شوند و سواب های نگهداری شده نباید برای استخراج DNA ژنومی استفاده شوند.

2. اگر مقدار نمونه بافت خیلی کم باشد، محتوای DNA ژنومی استخراج شده کمتر خواهد بود.

توصیه: دستورالعمل های نمونه برداری از سواب خوراکی در راهنمای عمل را دنبال کنید، تا جایی که ممکن است پاک کنید تا سلول های کافی برای استخراج DNA ژنومی به سواب دهان متصل شود.

3. Foregene Protease به طور نامناسب حفظ می شود و در نتیجه فعالیت آن کاهش می یابد یا غیرفعال می شود.

توصیه: شرایط نگهداری را تایید کنیدthe Foregene Protease یا جایگزینی آن با یک پروتئاز جدید پروتئاز Foregene برای واکنش آنزیمی.

4. مشکلات شوینده.

توصیه: از بافر EB برای شستشو استفاده کنید.در صورت استفاده از ddH₂O یا سایر شوینده ها، تأیید کنید که pH محلول شستشو بین 7.0-8.5 است.

5. محلول به صورت قطره ای به درستی اضافه نشده است.

توصیه: قطره های شوینده را به وسط غشای سیلیکونی اضافه کنید و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق بگذارید تا کارایی شستشو افزایش یابد.

6. مایع شستشو خیلی کم جمع می شود.

توصیه: حداقل از شوینده برای شستشوی DNA ژنومی همانطور که در دستورالعمل ها لازم است استفاده کنیدنه کمتر از 15μl.

Lوای خلوص of DNA ژنومیجدا شده

خلوص DNA ژنومی پایین می تواند منجر به شکست یا نتایج نامطلوب آزمایشات پایین دست شود، مانند: آنزیم ها نمی توانند باز شوند، PCR نمی تواند قطعه ژن مورد نظر را بدست آورد و غیره.

علل احتمالی به شرح زیر است:

1. آلودگی هتروپروتئین، آلودگی RNA.

تجزیه و تحلیل: ستون تصفیه با استفاده از بافر PW شسته نشد.ستون تصفیه شستشو بافر PW با استفاده از سرعت گریز از مرکز شسته نشد.

توصیه: قبل از افزودن اتانول از عدم وجود رسوب در مایع رویی اطمینان حاصل کنید.حتما ستون تصفیه را طبق دستورالعمل بشویید و این مرحله قابل حذف نیست.

2. آلودگی یونی ناخالصی.

تجزیه و تحلیل: ستون تصفیه شستشوی بافر WB تنها یک بار حذف یا شسته شد که منجر به آلودگی یونی باقیمانده شد.

توصیه: حتماً بافر WB را 2 بار طبق دستور شستشو دهید تا یون های باقیمانده تا حد امکان حذف شوند.

3. آلودگی آنزیم RNA.

تجزیه و تحلیل: RNaseهای خارجی به بافر اضافه شدند.عملیات شستشوی بافر PW نادرست بود، که منجر به باقیمانده‌های RNase شد که بر عملیات آزمایشی RNA پایین دست، مانند رونویسی آزمایشگاهی، تأثیر گذاشت.

توصیه: نوکلئیک اسید سری Foregeneایزولاکیت های tion می توانند RNA را بدون افزودن RNase اضافی حذف کنند.بدین ترتیب کیت جداسازی DNA کارت سواب باکال/FTAنیاز است't RNase را اضافه کنید.حتماً دستورالعمل های ستون تصفیه شستشوی Buffer PW را دنبال کنید و این مرحله را نمی توان حذف کرد.

4. باقی مانده اتانول.

تجزیه و تحلیل: بافر WB پس از شستشوی ستون تصفیه، سانتریفیوژ لوله خالی را انجام نداد.

توصیه: عمل سانتریفیوژ لوله خالی را طبق دستورالعمل صحیح انجام دهید.

5. سایر آلودگی های ناخالصی.

تجزیه و تحلیل: نمونه های ذخیره شده یا نمونه های خاص از قبل درمان نمی شوند.

توصیه: نمونه را طبق دستورالعمل کاملاً از قبل آماده کنید.