ویژگی بارز واکنش PCR ظرفیت تقویت زیاد و حساسیت بسیار بالا آن است.به منظور بهبود عملکرد PCR و کارایی تشخیص، ما متعهد به بهبود ظرفیت تقویت PCR و حساسیت تشخیص هستیم، اما سردرد در مرحله آزمایش است.اغلب موارد مثبت کاذب رخ می دهد و مقدار بسیار کمی از آلودگی متقاطع نمونه یا آلودگی محصول PCR ممکن است باعث مثبت کاذب در آزمایش شود.
پنج نوع آلودگی محصول PCR
دلایل زیادی برای آلودگی PCR وجود دارد که به طور کلی می توان آنها را به دسته های زیر تقسیم کرد:
آلودگی نمونه عمدتاً به دلیل آلودگی ظرف جمع‌آوری نمونه ایجاد می‌شود یا زمانی که نمونه قرار می‌گیرد به دلیل شل بودن درزگیری از ظرف خارج می‌شود یا نمونه به بیرون ظرف چسبیده است که باعث آلودگی متقاطع می‌شود.آلودگی منجر به آلودگی بین نمونه ها می شود.برخی از نمونه‌های میکروبی، به‌ویژه ویروس‌ها، می‌توانند با آئروسل‌ها پخش شوند یا آئروسل‌ها را تشکیل دهند و در نتیجه آلودگی متقابل ایجاد کنند.
دلیل اصلی این است که در حین تهیه معرف های PCR، تفنگ نمونه، ظرف، آب مقطر دوبار مقطر و سایر محلول ها توسط قالب اسید نوکلئیک PCR آلوده می شوند.
در آزمایشگاه های زیست شناسی مولکولی و برخی از آزمایشگاه هایی که از پلاسمیدهای کلون شده به عنوان کنترل مثبت استفاده می کنند، مشکل آلودگی پلاسمیدهای کلون شده نیز رایج است.زیرا محتوای پلاسمید شبیه سازی در حجم واحد کاملاً زیاد است و در فرآیند خالص سازی به ابزار و معرف های بیشتری نیاز است و پلاسمید موجود در سلول های زنده به دلیل توانایی رشد و تکثیر قوی سلول های زنده به احتمال زیاد آلوده می شود.
آلودگی محصولات تقویت شده شایع ترین مشکل آلودگی در واکنش های PCR است.از آنجایی که مقدار کپی محصول PCR زیاد است (معمولاً 1013 کپی در میلی لیتر)، که بسیار بیشتر از حد مجاز تعداد کپی تشخیص PCR است، مقدار بسیار کمی از آلودگی محصول PCR می تواند باعث مثبت کاذب شود.
آلودگی آئروسل محتمل ترین شکل آلودگی محصولات PCR است، و همچنین ساده ترین نوع آلودگی است که می توان نادیده گرفت.از اصطکاک بین سطح مایع و هوا تشکیل می شود.به طور کلی، آلودگی آئروسل می تواند هنگام باز شدن درب، هنگامی که نمونه آسپیره می شود یا حتی هنگامی که لوله واکنش به شدت تکان می خورد ایجاد شود.طبق محاسبات، یک ذره آئروسل می تواند حاوی 48000 نسخه باشد، بنابراین آلودگی ناشی از آن مشکلی است که شایسته توجه ویژه است.
به طور خاص، آزمایشگاه های آزمایش اغلب از یک جفت پرایمر برای آزمایش یک ژن خاص استفاده می کنند.با گذشت زمان، مقدار زیادی آلودگی محصول PCR در فضای آزمایشگاه رخ می دهد.هنگامی که چنین آلودگی رخ می دهد، از بین بردن آن در یک زمان کوتاه دشوار است.
برای سه نوع اول آلودگی، می‌توان از ابزارهای مؤثر برای جلوگیری استفاده کرد، اما پیشگیری از آلودگی ناشی از محصولات PCR، به‌ویژه در ساخت آزمایشگاه‌های غیر استاندارد PCR، دشوار است.در فرآیند PCR، هنگامی که نوک پیپت مایع را می مکد و می دمد و پوشش لوله PCR باز می شود، یک آئروسل تشکیل می شود.مولکول های DNA حمل شده توسط آئروسل (یک آئروسل می تواند ده ها هزار DNA را حمل کند) به سختی حذف می شوند زیرا در هوا شناور هستند.هنگامی که دور بعدی آزمایشات PCR معرفی شود، نتایج مثبت کاذب ناگزیر رخ خواهد داد.
همانطور که در شکل زیر نشان داده شده است، کنترل منفی باند مورد نظر مربوطه را نیز تقویت کرد:
بخش اول این موضوع آلودگی و پیشگیری از PCR در اینجا معرفی می شود.شماره بعدی قسمت دوم «پیشگیری از آلودگی محصول PCR» را برای شما خواهد آورد، پس با ما همراه باشید!
زمان ارسال: ژوئیه-25-2017
