برای استاندارد کردن رفتار پرسنل آزمایش، SOP آزمایش PCR را ایجاد کنید.
آزمایشگر به شدت از رویه های عملیاتی پیروی می کند و آلودگی PCR را که ممکن است توسط عوامل انسانی ایجاد شود یا از وقوع آلودگی جلوگیری می کند به حداقل می رساند.علاوه بر این، آزمایشگر باید دانش و مهارت های حرفه ای مربوطه، از جمله مهارت در کار با تجهیزات مرتبط، شفاف سازی کل فرآیند کار، تسلط بر روش های درمان آلودگی و روش های کنترل کیفیت آزمایشگاهی، و توانایی تفسیر صحیح نتایج آزمایش را داشته باشد.
یک آزمایشگاه استاندارد PCR ایجاد کنید.
آزمایشگاه PCR اصولاً به چهار ناحیه تقسیم می شود، یعنی منطقه آماده سازی معرف، منطقه پردازش نمونه، منطقه تقویت و منطقه تجزیه و تحلیل محصول تقویت.دو ناحیه اول مناطق پیش تقویت و دو ناحیه آخر مناطق پس از تقویت هستند.منطقه قبل از تقویت و منطقه پس از تقویت باید به شدت از هم جدا شوند.مواد آزمایشی، معرف‌ها، کاغذ ضبط، قلم‌ها، مواد تمیزکننده و غیره فقط می‌توانند از ناحیه قبل از تقویت به ناحیه پس از تقویت، یعنی از منطقه آماده‌سازی معرف → منطقه پردازش نمونه → منطقه تقویت → منطقه تجزیه و تحلیل محصول تقویتی، جریان داشته باشند و نباید به سمت عقب جریان پیدا کنند.جریان هوا در آزمایشگاه نیز باید از ناحیه پیش تقویت به ناحیه پس از تقویت جریان داشته باشد و به سمت عقب جریان نداشته باشد.طرح ایده آل آزمایشگاه PCR در زیر نشان داده شده است:
شکل A: حالت راه اندازی آزمایشگاهی PCR ایده آل با فشار منفی در اتاق بافر
شکل B: حالت راه اندازی آزمایشگاهی PCR ایده آل با فشار مثبت در اتاق بافر
نمودارهای راه اندازی آزمایشگاه PCR ارائه شده در شکل A و شکل B باید حالت راه اندازی ایده آل تری باشد و آزمایشگاه دارای شرایط می تواند برای طراحی به این حالت مراجعه کند.برای آزمایشگاه های معمولی توصیه می شود که می توان ناحیه تقویت PCR و ناحیه آنالیز محصول را از هم جدا کرد و تا حد امکان دهانه پوشش را در ناحیه آماده سازی نمونه و ناحیه تقویت PCR کاهش داد.به یاد داشته باشید: محصولات و لوازم آزمایشی در منطقه تجزیه و تحلیل محصول به شدت ممنوع است از منطقه آماده سازی نمونه و منطقه تقویت PCR.
اگر آزمایشگاه فقط تشخیص و شناسایی PCR را انجام می دهد، توصیه می شود به جای PCR معمولی از PCR کمی فلورسنت استفاده شود.
نتایج تشخیص کمی PCR فلورسانس را می توان با سیگنال های فلورسانس جمع آوری و تجزیه و تحلیل کرد، بنابراین نیازی به باز کردن درب برای الکتروفورز پس از واکنش نیست، که از آلودگی محصول PCR ناشی از نشت محصولات واکنش برای تشکیل ذرات معلق در هوا جلوگیری می کند.اگر در مرحله بارگذاری الکتروفورز ژل، تعداد دهانه های درپوش را افزایش دهید، احتمال آلودگی آئروسل وجود دارد.توصیه می شود استفاده از PCR کمی را ترویج داده و به تدریج جایگزین PCR کیفی شود.
برای واکنش PCR از سیستم آلودگی محصول ضد PCR UNG استفاده می شود.
این سیستم به جای dTTP از dUTP استفاده می کند.پس از واکنش PCR، تمام محصولات PCR (قطعات DNA) با dUTP ترکیب می شوند.در دور بعدی واکنش PCR، آنزیم UNG اضافه شده به سیستم در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه قبل از PCR انکوبه می شود، که می تواند به طور خاص تمام قطعات DNA حاوی dUTP را تجزیه کند و سپس واکنش PCR را انجام دهد.این می تواند آلودگی آئروسل ناشی از محصولات PCR را به طور کامل حذف کند.اثر در شکل زیر نشان داده شده است:
توجه: برای سری مستقیم PCR می توانید سری محصولات سیستم آلودگی محصول ضد PCR Foregene را انتخاب کنید.پیشنهاد می دهد
برای آزمایشگاه هایی که آزمایش ژنوتیپ در مقیاس بزرگ را انجام می دهند، اکیداً توصیه می شود از سیستم آلودگی محصول ضد PCR UNG برای آزمایش معرف ها علاوه بر ساخت آزمایشگاه های معقول استفاده شود.
یادآوری: استفاده از این سیستم نمی تواند آلودگی محصول PCR را که قبلاً ایجاد شده است از بین ببرد.بنابراین در ابتدای آزمایش مربوطه باید از سیستم UNG و برای تقویت PCR از سیستم UNG استفاده شود تا از آلودگی محصولات PCR جلوگیری شود.
توصیه می شود هنگام انجام آزمایشات در مقیاس بزرگ از سیستم مستقیم PCR-UNG Foregene استفاده کنید، مانند:
کیت PCR مستقیم برگ گیاهی-UNG.
کیت PCR مستقیم بذر گیاهی-UNG.
کیت PCR مستقیم بافت حیوانی-UNG
کیت Mouse Tail Direct PCR-UNG.
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
این سری از کیت ها از Foregeneنه تنها می تواند تشخیص PCR را به سرعت و در مقیاس بزرگ انجام دهد، بلکه به طور موثر از آلودگی محصول PCR جلوگیری و کنترل می کند.
زمان ارسال: مارس-19-2021
