آنزیم Hot-start Taq به طور گسترده استفاده می شود.در مقایسه با DNA پلیمراز معمولی، آنزیم شروع داغ Taq می تواند به طور موثری از تقویت غیر اختصاصی و تشکیل دایمرهای آغازگر جلوگیری کند و به طور موثری می تواند میزان موفقیت تقویت ژن هدف را بهبود بخشد.به خصوص در زمینه آزمایشات ژنتیکی، آنزیم Hot Start Taq به عنوان یک استاندارد اجباری در صنعت شناسایی شده است و نباید از DNA پلیمراز معمولی استفاده شود.همانطور که از مطالب بالا مشاهده می شود، آنزیم های Taq با شروع داغ به طور گسترده مورد استفاده قرار می گیرند.در حال حاضر برندهای زیادی از آنزیم های تاک هات استارت در بازار داخلی وجود دارد، اما آنزیم های تاک هات استارت چندانی با کیفیت بالا وجود ندارد.در مواجهه با بسیاری از محصولات آنزیمی Taq شروع داغ، چگونه باید انتخاب کنیم؟

1. آنزیم شروع داغ Taq را با راندمان تقویت بالا انتخاب کنید

راندمان تقویت PCR ارتباط نزدیکی با عملکرد آنزیم Taq دارد.پس از بهینه سازی یک سیستم واکنش آنزیمی Taq خوب، راندمان تقویت بالای 95٪ است و دامنه تقویت مقدار اولیه قالب گسترده است.هنگامی که محتوای ژن هدف کم است، می توان تقویت رضایت بخش را به دست آورد، و زمانی که مقدار الگو زیاد است و دوره تقویت نمایی طولانی است مسموم شدن آسان نیست.برای آنزیم Taq با عملکرد ضعیف، حتی اگر سیستم واکنش چندین بار بهینه شده باشد، بازده تقویت هنوز کمتر از 90٪ است، شکل "S" منحنی تقویت واضح نیست، شیب کوچک است و منحنی صاف است.وقتی مقدار قالب کم باشد، نمی توان آن را تقویت کرد و زمانی که مقدار قالب زیاد است، اثر تقویت ایده آل نیست.بنابراین، انتخاب DNA پلیمرازها با راندمان تقویت بالا برای موفقیت PCR و qPCR بسیار مهم است.

2. آنزیم Taq شروع داغ را با قدرت آنزیمی قوی انتخاب کنید

قدرت آنزیمی آنزیم Taq مربوط به راندمان تقویت است.به طور کلی، هرچه قدرت آنزیمی آنزیم Taq با شروع داغ قوی‌تر باشد، دوره رشد نمایی تقویت PCR طولانی‌تر است، منحنی S شکل معمولی‌تر، مقدار سیگنال فلورسانس بالاتر و برای تشخیص Multiplex PCR مناسب‌تر است.DNA پلیمرازهای مارک با قدرت آنزیمی ضعیف معمولاً فقط می توانند واکنش های 2-plex را پشتیبانی کنند.هنگام انجام واکنش های 3-plex، منحنی تقویت کم است، مقدار سیگنال فلورسانس کم است، و منحنی تقویت معمولی وجود ندارد، بنابراین قضاوت در مورد نتایج دشوار است.

3. یک آنزیم Taq شروع داغ با حساسیت بالا انتخاب کنید

به طور کلی، DNA پلیمراز دارای راندمان تقویت و حساسیت بالا است، اما ناسازگاری هایی نیز وجود دارد.در صورتی که فراوانی ژن هدف نمونه مورد تکثیر کم باشد، آزمایش حساسیت به تقویت آنزیم Taq توصیه می شود.متداول ترین روش تشخیص، انجام رقت شیب 10 یا 5 برابری قطعه پلاسمید ژن هدف، انجام تشخیص PCR در رقت پایین تر، و انتخاب آنزیم شروع داغ Taq با حساسیت تشخیص بالاتر است.

از موارد فوق می توان دریافت که محققان باید با توجه به نیازهای تجربی و شرایط بودجه خود انتخاب کنند.بهتر است آزمایش تقویت گرادیان رقت برای تشخیص بازده تقویت و حساسیت آنزیم Taq شروع داغ انجام شود.

نمونه ای از Foregene's Taq DNA پلیمراز:

Foreasy HS Taq DNA Polymerase

شرح

Foreasy HS Taq DNA Polymerase یک DNA پلیمراز است که در باکتری مهندسی اشرشیاکلی توسط فناوری نوترکیبی ژن بیان می شود.این آنزیم با یک بافر واکنش منحصر به فرد ترکیب می شود که باعث می شود محصول بسیار مقاوم و سازگار باشد و می تواند مستقیماً از لیز نمونه (سیستم Foregene Lysis) به عنوان الگویی برای واکنش های تشخیص استفاده کند.

کاربرد

PCR کیفی و تشخیص کمی PCR قالب های خالص شده و قالب های غیر خالص.

کنترل کیفیت

1. هیچ فعالیت نوکلئاز اگزوژن شناسایی نشده است

2. روش PCR برای تشخیص DNA ژنومی باقیمانده بدون میزبان

3. می تواند به طور موثری ژن های تک نسخه ای را در ژنوم انسان تقویت کند

4. به مدت یک هفته در دمای اتاق نگهداری شود، تغییرات فعالیت آشکار نیست

جزئیات محصول: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/