آزمایش آزمایشگاهی با جمع‌آوری نمونه آغاز می‌شود و جمع‌آوری نمونه ساده‌ترین روشی است که می‌توان نادیده گرفت.مهمترین چیز برای جمع آوری نمونه، انتخاب نوع نمونه صحیح، استفاده از ابزارهای نمونه برداری مناسب و انجام حمل و نقل و پردازش معقول است.

I.نوع نمونه

انواع نمونه رایج به شرح زیر است:

روش نمونه‌گیری می‌تواند به مشخصات فنی پایش زیست‌محیطی ویروس کرونا در بازار بازرگانی کشاورزی (بازار) مراجعه کند.

1. نمونه برداری از سواب های گلو، دست ها، لباس ها و سایر اشیاء تمرین کنندگان: لازم است از محلول حفظ ویروس در لوله نمونه برداری ویروس استفاده شود و به طور کامل در سواب های پنبه نمونه گیری نفوذ کند.سطح زمین) به طور مکرر اعمال می شود و بیش از 3 بار شستشو داده می شود.در عین حال لازم است نمونه برداری پراکنده چند نقطه ای روی سطح جسم نمونه برداری شده انجام شود.

2. نمونه سواب سطح غذا: نمونه های غذا را نمی توان به طور مستقیم جمع آوری کرد.غذای جمع آوری شده باید قبل از جمع آوری نمونه سواب به دقت جدا شده و در کیسه نمونه برداری تمیز نگهداری شود.لازم است از محلول نگهدارنده ویروس در لوله نمونه برداری ویروس استفاده شود، پس از خیس کردن کامل سواب پنبه نمونه برداری، سطح نمونه غذای جمع آوری شده را به طور مکرر مالش داده و بیش از 3 بار شستشو داده شود.در عین حال لازم است نمونه برداری پراکنده چند نقطه ای روی سطح نمونه انجام شود.

3. نمونه های فاضلاب: با توجه به توزیع سیستم زهکشی در بازار، 2-3 محل نمونه برداری فاضلاب را با تمرکز بر مجموعه شبکه لوله داخلی، پایین دست جهت جریان آب و یا اتصال با شبکه لوله شهری انتخاب کنید.برای جمع آوری نمونه سواب، آن را با یک سواب پنبه نمونه در فاضلاب فرو کنید تا فاضلاب را جذب کند و بیش از 3 بار در لوله نمونه برداری شستشو دهید.برای جمع آوری نمونه های فاضلاب، از بطری های پلاستیکی پلی اتیلن برای جمع آوری نمونه های 30-500 میلی لیتری فاضلاب استفاده کنید.برای جمع آوری فاضلاب با حجم بیش از 500 میلی لیتر، می توان از سطل های پلاستیکی پلی اتیلن یا تجهیزات ویژه غنی سازی نمونه آب در محل استفاده کرد.در عین حال انجام نمونه برداری پراکنده چند نقطه ای برای محل نمونه برداری فاضلاب ضروری است.

4. نمونه های حیوانی: برای حیوانات زنده می توان از سواب های نمونه برداری برای جمع آوری سواب های سطح بدن، سواب های دهان و حلق و سواب مقعدی استفاده کرد و نمونه های مدفوع یا ترشح را نیز می توان بر اساس آن در برگه ثبت جمع آوری و ثبت کرد.برای نمونه‌های حیوانی که تحت پوست‌گیری قرار گرفته‌اند و غیره، از سواب‌های پنبه‌ای برای جمع‌آوری سطح بدن و نمونه‌های سواب حفره بدن آنها استفاده کنید.لازم است از محلول نگهدارنده ویروس در لوله نمونه گیری ویروس استفاده شود تا به طور کامل به سواب پنبه نمونه گیری نفوذ کند و سپس استفاده از سطح نمونه غذایی جمع آوری شده را تکرار کنید.شابو بیش از 3 بار.در عین حال لازم است نمونه برداری پراکنده چند نقطه ای روی سطح نمونه انجام شود.

5. سایر وسایل: ظروف حمل و پرورش و پرورش حیوانات مانند قفس یا مخازن ماهی.ابتدا انواع خاصی از حیوانات ذخیره شده و پرورش یافته در ظرف را مشاهده یا درک کنید و نمونه های سواب را روی دیواره داخلی ظرف یا نمونه های مایع محتویات جمع آوری کنید.

6. نمونه های آئروسل را در مناطقی که افراد جمع می شوند، مناطق تجاری محلی با تهویه ضعیف، دفاتر و اتاق های استراحت جمع آوری کنید.

II.ابزار نمونه گیری
1. لوله جمع آوری خون
اگر بعداً نیاز به آزمایش اسید نوکلئیک و نمونه های ضد انعقاد دارید، توصیه می شود از رگ خونی خلاء حاوی ضد انعقاد EDTA برای جمع آوری خون استفاده کنید.برای نمونه های سرم، استفاده از رگ خونی خلاء بدون ضد انعقاد توصیه می شود.

2. سواب نمونه برداری

توصیه می شود به جای سواب های آلژینات کلسیم یا سواب های چوبی از سواب های پلی پروپیلن استفاده کنید، زیرا ممکن است حاوی موادی باشند که برخی از ویروس ها را غیرفعال کرده و آزمایش PCR را مهار کنند.سواب با سر پنبه را نمی توان استفاده کرد، زیرا الیاف پنبه جذب قوی پروتئین دارند و به راحتی در محلول نگهداری بعدی شسته نمی شوند.

در "مشخصات فنی برای جمع آوری مخلوط 10 در 1 و تشخیص اسیدهای نوکلئیک جدید کروناویروس"، به وضوح تصریح شده است که "سواب نمونه برداری باید از پلی استر، نایلون و سایر مواد غیر پنبه ای و غیر کلسیمی آلژینات باشد و دسته باید از مواد غیر چوبی باشد.نقطه شکست حدود 3 سانتی متر از بالای سر سواب است که به راحتی شکسته می شود.

CDC در ایالات متحده همچنین اشاره کرد که "فقط از سواب های الیاف مصنوعی با شفت های پلاستیکی یا سیمی استفاده کنید.از سواب های آلژینات کلسیم یا سواب های با شفت های چوبی استفاده نکنید.زیرا ممکن است حاوی موادی باشند که برخی از ویروس ها را غیرفعال کرده و آزمایش PCR را مهار می کند.

در حال حاضر به طور گسترده استفاده می شود یک سواب نایلونی استریل یکبار مصرف ترکیب شده با یک میله پلاستیکی.سواب فلاکینگ سرعت جذب و رهاسازی آب بهتری دارد.با توجه به سایت های مختلف نمونه برداری، سر سواب نیز دارای اندازه ها و الیاف متفاوتی است.ضخامت.”

3. نمونه راه حل نگهداری حمل و نقل

محلول حفظ غیرفعال‌سازی ویروس: مقدار مناسبی از غلظت نمک گوانیدین و انواع اجزای لیز ویروس می‌تواند مستقیماً ویروس را لیز کند تا اسید نوکلئیک آزاد کند، RNase و DNase را غیرفعال کند و از یکپارچگی اسید نوکلئیک اطمینان حاصل کند که می‌تواند برای تشخیص qPCR بعدی استفاده شود.نمی توان از آن برای کشت و جداسازی ویروس استفاده کرد.

محلول انتقال و نگهداری ویروس: حاوی املاح، اسیدهای آمینه، ویتامین ها، گلوکز و پروتئین مورد نیاز برای بقای ویروس است که می تواند فعالیت ویروس را حفظ کند.می توان از آن برای استخراج اسید نوکلئیک و شناسایی ویروس در آینده و همچنین برای کشت و جداسازی ویروس استفاده کرد.

4. لوله نگهداری نمونه و کیسه نمونه

لوله ذخیره سازی نمونه باید یک لوله پلاستیکی استریل با درپوش پیچی باشد که اسید نوکلئیک را جذب نکند.هر لوله نمونه باید با یک کیسه نمونه پوشانده شود تا از نشت و آلودگی نمونه جلوگیری شود.

III.مواد مداخله گر در نمونه

مواد مداخله گر در آزمایشات PCR

1. مداخله درون زا

مواد موجود در نمونه بدن می توانند در تشخیص سایر مواد اختلال ایجاد کنند.

خون:هم (> 1mg/ml)، همین (> 0.1ng/μl)، تری گلیسیرید، IgG و غیره.

ادرار:اوره (20 میلی متر)؛

مدفوع:پلی ساکاریدهای گیاهی، کلات؛

بافت:پروتئاز، کلاژن؛

شیر: پروتئاز، یون کلسیم؛

مواد مخدر: آنتی بیوتیک ها، داروهای ضد ویروسی، هورمون ها و غیره.

دیگر.

2. تداخل اگزوژن

از موادی می آید که می توانند در تشخیص سایر مواد در شرایط آزمایشگاهی اختلال ایجاد کنند.مواد افزودنی نمونه و موادی که می توان در طول جمع آوری و پردازش نمونه با آنها تماس گرفت:

لوازم تست: ژل جداکننده سرم، ظرف جمع آوری نمونه و درب لاستیکی، کاتتر، مایع شستشوی کاتتر، پودر دستکش و غیره.

پادبند: هپارین (> 0.1 واحد بر میلی لیتر)، EDTA (> 0.5 میلی مولار) و غیره.

حلال های آلیایزوپروپانول (> 0.1 واحد بر میلی لیتر)، بتائین، دی متیل سولفوکسید، فرمامید، گلیسیرین، PEG و غیره.

ضد عفونی کننده ها: الکل ها (اتانول> 1%)، آلدئیدها، فنل ها (فنل> 0.2%)، پراکسیدها، اسیدهای قوی (HCL)، قلیایی قوی (NaOH) و غیره.

مواد شوینده:SDS (>0.005٪)؛

خاک: هوموس

مواد رنگی: نیل

دیگر.

در شرایط واقعی نمونه برداری در فضای باز، مانند جمع آوری نمونه های محیطی، نمونه ها ممکن است حاوی انواع مختلفی از مواد مزاحم باشند، و ترکیب مواد مزاحم در هر مکان متفاوت است، که نیاز به انجام آزمایش های تداخل PCR بر اساس شرایط محلی دارد.

IV.شرایط نگهداری و حمل و نقل نمونه

نمونه های بالینی تازه جمع آوری شده باید ظرف 2 تا 4 ساعت پس از جمع آوری در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد به آزمایشگاه فرستاده شوند.ظرف 24 ساعت در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شود.نمونه های مورد استفاده برای جداسازی ویروس و تشخیص اسید نوکلئیک باید در اسرع وقت آزمایش شوند.نمونه هایی که می توانند ظرف 24 ساعت آزمایش شوند را می توان در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری کرد.نمونه هایی که در عرض 24 ساعت قابل شناسایی نیستند باید در دمای 70- درجه سانتیگراد یا کمتر نگهداری شوند (اگر نه- در دمای 70 درجه سانتیگراد در یخچال 20- درجه سانتیگراد نگهداری شود).

خلاصه:جمع آوری استاندارد، حمل و نقل و ذخیره سازی نمونه ها برای آزمایش های بعدی ضروری است.منفی کاذب بسیاری از آزمایشات آزمایشگاهی ناشی از جمع آوری، حمل و نقل و ذخیره سازی نامناسب نمونه ها است که منجر به تخریب اسید نوکلئیک ویروسی می شود.با این حال، بسیاری از آزمایشگاه ها هنوز اهمیت نمونه برداری را نادیده می گیرند.امیدوارم این مقاله بتواند توجه همگان را به نمونه گیری بیدار کند و نمونه گیری علمی و منطقی تری داشته باشد!

محصولات مرتبط:

کیت تشخیص اسید نوکلئیک نوع SARS-CoV-2 (I) (روش پروب فلورسنت PCR Multiplex) - برای تشخیص جهش یافته ها از برزیل، آفریقای جنوبی و بریتانیا