روش های PCR و آلودگی آئروسل اسید نوکلئیک در آزمایشگاه های آزمایش اسید نوکلئیک مانند دو روی یک سکه است.ما فقط می توانیم انتخاب کنیم که آن را داشته باشیم یا نداشته باشیم، اما نمی توانیم انتخاب کنیم که آن را بخواهیم یا خرج کنیم.

1. غربالگری حذف کننده DNA

برای دستیابی به حذف فضایی آلودگی آئروسل اسید نوکلئیک، ابتدا لازم است حذف کننده های DNA که می توانند اسیدهای نوکلئیک را در حالت مایع حذف کنند، غربالگری شوند.زیرا حذف کننده های DNA زیادی وجود ندارد که واقعا کار کند.برای روش آزمایشی به این مطلب مراجعه کنید: حذف کننده DNA نمی تواند "گوشه مخفی" آزمایشگاه باشد!

در این آزمایش، 100 کپی در میکرولیتر (CT تقریباً 31) از پلاسمید ASFV و حذف کننده DNA که با روش دیجیتال PCR اندازه‌گیری شده بود، در حجم‌های مساوی مخلوط شدند و سپس در دمای اتاق به ترتیب به مدت 10 دقیقه، 20 دقیقه و 30 دقیقه واکنش نشان دادند.پس از استخراج اسید نوکلئیک، تقویت qPCR انجام شد.یک کنترل مثبت مخلوط با پلاسمید و آب مقایسه شد.از آنجایی که آزمایش به طور همزمان کامل نشده است، ممکن است انحراف خاصی بین نتایج وجود داشته باشد، اما بر نتیجه آزمایش تأثیری ندارد.تاکنون 10 محصول تجاری حذف کننده DNA را ارزیابی کرده ام.فقط محصولات شماره 1، شماره 6 و شماره 8 می توانند به طور موثر DNA پلاسمید را در حالت مایع تجزیه کنند.سایر محصولات تقریباً هیچ تأثیری ندارند.

جدول 1 اثر حذف اسید نوکلئیک از حذف کننده DNA تجاری موجود

2. آزمایش اثر حذف DNA ضدعفونی کننده های رایج

1. غربالگری ضدعفونی کننده های رایج

انواع مختلفی از ضدعفونی‌کننده‌ها معمولاً در آزمایشگاه‌ها استفاده می‌شوند: آلدئیدها، فنل‌ها، الکل‌ها، نمک‌های آمونیوم چهارتایی، پراکسیدها، آماده‌سازی‌های کلر، و اسیدها و بازها.اثرات ضد عفونی این مواد ضد عفونی کننده بر روی میکروارگانیسم ها به طور کامل توسط آزمایشات تأیید شده است، اما هیچ داده تجربی کافی در مورد اثر تخریب اسیدهای نوکلئیک وجود ندارد.آزمایشگاه های آزمایش اسید نوکلئیک به ماده ضدعفونی کننده ای نیاز دارند که نه تنها اثر ضدعفونی خوبی بر روی میکروارگانیسم ها داشته باشد، بلکه بتواند DNA را نیز تجزیه کند.نتایج آزمایش نشان می دهد که تنها دو آماده سازی کلر از 84 ماده ضد عفونی کننده و اسید تری کلرو ایزوسیانوریک و اسید هیدروکلریک 1 مولار نیازها را برآورده می کنند.از آنجایی که اسید کلریدریک 1 مولار بسیار خورنده است، توصیه می شود که از آماده سازی کلر به عنوان دفع زباله در آزمایشگاه های آزمایش اسید نوکلئیک استفاده شود.با این حال، آماده سازی کلر برای فلزات خورنده است و نمی توان از آن برای ضد عفونی ابزار و تجهیزات استفاده کرد.

جدول 2 اثرات حذف DNA انواع مختلف ضدعفونی کننده ها

2. حداقل غلظت موثر آماده سازی کلر

ضدعفونی‌کننده‌های مبتنی بر کلر اثر تخریب DNA قوی دارند، اما به دلیل خورندگی و تحریک‌پذیری فلز، می‌توان از آن‌ها برای تمیز کردن کف، میزهای غیرفلزی، نوک خیساندن، لوله‌های سانتریفیوژ و سایر موارد آزمایشی استفاده کرد.

با توجه به "دستورالعمل های فنی ضد عفونی اپیدمی پنومونی کرونر جدید": آلاینده ها (خون، ترشحات و استفراغ بیماران) کلر موجود 5g/L-10g/L ضدعفونی کننده حاوی کلر.کف ها، دیوارها و سطوح اشیاء از کلر موجود 1 گرم در لیتر استفاده می کنند ضدعفونی کننده کلر: لباس ها، ملافه ها و سایر منسوجات ابتدا در ضدعفونی کننده کلر با 0.5 گرم در لیتر کلر موجود به مدت 30 دقیقه خیس می شوند و سپس طبق معمول تمیز می شوند.

جدول 3 اثر حذف DNA غلظت های مختلف ضدعفونی کننده کلر

نتایج آزمایش نشان می دهد که: هنگامی که غلظت موثر کلر بیشتر یا مساوی 1.2 گرم در لیتر باشد، ضدعفونی کننده حاوی کلر می تواند 100 نسخه در میکرولیتر پلاسمید را به مدت 5 دقیقه به طور کامل تجزیه کند.هنگامی که به مدت 10 دقیقه عمل می کند، 84 ضد عفونی کننده با غلظت کلر موثر بیشتر یا مساوی 0.6 گرم در لیتر می تواند 100 نسخه در میکرولیتر از پلاسمیدها را به طور کامل تجزیه کند.

3. آزمایش حذف هوا آلوده به آئروسل اسید نوکلئیک

چگونه هوای آلوده شده توسط آئروسل های اسید نوکلئیک را تمیز کنیم؟بیشتر افکار ایجاد یک محیط آلوده به آئروسل و سپس تمیز کردن آن یا پاکسازی اسیدهای نوکلئیک پس از آلودگی است.برای من، آزمایشی که قابل تکرار نباشد و نتایج آزمایش را نمی توان به صورت کمی تجزیه و تحلیل کرد، بی معنی است، بنابراین برخی از روش های ضد عفونی کننده هوا را قرض گرفتم.به "الزامات عمومی GB27948-2020 برای ضدعفونی کننده های هوا" و "مشخصات فنی ضد عفونی" مراجعه کنید.

1. مواد تست

1.1 حذف کننده DNA: در این آزمایش، دو حذف کننده DNA تجاری 6 و 8 در جدول 1 انتخاب شدند.

1.2 پلاسمید آزمایش: با توجه به اینکه مقدار CT اکثر آلودگی های آزمایشگاهی بالاتر از 30 خواهد بود، غلظت پلاسمید ژن ASFV مورد استفاده این بار حدود 100 کپی در میکرولیتر است و CT کمی فلورسنت PCR حدود 07/31 است.پلاسمید را به سواب پنبه ای اضافه کنید و در هوا خشک کنید.

1.3 ابزار تست: ابزار ضد عفونی Bilingkehan KVBOX که با مهربانی توسط شرکت فناوری زیست محیطی Shenzhen Runlian پشتیبانی می شود، دارای عملکرد عالی ضد عفونی هوا با ضدعفونی کننده پراکسید هیدروژن است و می تواند به طور موثر اسپورها و سایر میکروارگانیسم ها را از بین ببرد.

1.4 فضای تست: یک پنجره انتقال بسته حدود 0.1 متر مکعب.

2. روش تست

مقدار مجموعه ضدعفونی کننده روی دستگاه ضد عفونی 10 میلی لیتر و غلظت آن 100 میلی لیتر بر متر مکعب است که بسیار بیشتر از «نیازهای عمومی GB27948-2020 برای ضد عفونی کننده های هوا» است: هنگام استفاده از ضد عفونی کننده اسپری آئروسل، مقدار ضد عفونی کننده باید ≤10 میلی لیتر در متر مکعب باشد.