نکاتی برای بهبود بازیابی چسب

1. بار نمونه را در طول الکتروفورز افزایش دهید.

2. از بافر الکتروفورز تازه تهیه شده استفاده کنید.

3. هنگام برش چسب، سعی کنید فقط چسب را با نوارها برش دهید تا حجم برش چسب کاهش یابد: به چسب با تکه های هدف کمی نیاز ندارید، در غیر این صورت بر میزان بازیابی تأثیر می گذارد.

4. بعد از ذوب دو یا چند تکه چسب، از لوله ای هر چقدر هم که حجم داشته باشد استفاده کنید و به همان ستون منتقل کنید.

5. محلول اضافه شده در سل می تواند کمی بیشتر باشد، که برای اتصال DNA به غشاء مساعدتر است، اما به طور کلی از 750 ul تجاوز نمی کند.

6. کلید بازیابی ژل، اتصال DNA به ستون از طریق غلظت نمک، اسیدیته (بار) و آبگریزی محلول در ستون است.بنابراین، اگر PH بافر الکتروفورز خیلی بالا باشد، می توان 10 ul (pH 5.0، 3mol/L NaAC) به سل اضافه کرد.برای رهگیری بهتر مولکول های DNA روی غشاء، می توان 30% ایزوپروپانول را اضافه کرد تا پس از حل شدن چسب، به مایع گرم شود.

7. قبل از افزودن ماده شوینده، ستون را به مدت چند دقیقه (حدود 10 دقیقه) در دمای اتاق بگذارید تا اتانول کاملاً تبخیر شود.

8. در نهایت، شوینده کمتری اضافه کنید تا حجم بازیابی به حداقل برسد.به طور کلی، 30-50 میکرولیتر شوینده برای شستشو استفاده می شود (نه خیلی کم، در غیر این صورت نمی تواند غشاء را خیس کند، که منجر به شستشو نمی شود).قطرات شستشو در مرکز غشا قرار دارند تا DNA متصل به غشاء را به طور کامل شستشو دهند.

9. پس از افزودن ماده شوینده، می توان آن را به مدت 5 دقیقه در حمام آب 55 درجه شست و یا بیش از 10 دقیقه در حمام آب 50 درجه قرار داد و یا یک شب با پارافیلم در دمای 4 درجه مهر و موم کرد و سپس برای بازیابی روز بعد سانتریفیوژ کرد، اثر خوب است.

10. محلول سانتریفیوژ شده را دوباره به ستون جذب اضافه کنید و دوباره سانتریفیوژ کنید.

روش ها و روش های دقیق برای بازیابی محصول PCR

1. بازیافت لاستیک معمولی

اگر می خواهید چسب را بازیابی کنید، بهتر است از کیت استفاده کنید که راحت است و میزان بازیابی کمی بالاتر دارد.اگر واقعاً نیاز به بازیابی آن به صورت دستی دارید، می توانید پس از برش چسب، 3 برابر حجم TE اضافه کنید.پس از ذوب شدن در حمام آب، فنل، فنل/کلروفرم به طور تمیز استخراج شده و اتانول رسوب می‌کند.خودشه.

2. بازیابی DNA از ژل های با نقطه ذوب پایین

خالص سازی قطعات DNA TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0، 0.1 mmol/l EDTA) برابر با حجم ژل اضافه کنید و به مدت 5 دقیقه در حمام آب با دمای 65 درجه سانتیگراد قرار دهید تا ژل کاملاً حل شود.

پس از رساندن آن به دمای اتاق، مقدار مساوی فنل (اشباع شده با TE، TE در لایه بالایی مهر و موم شد و لایه پایینی فنل حذف شد) اضافه شد و مخلوط به آرامی مخلوط شد (بدون نیاز به اختلاط) و با سرعت 12000 دور در دقیقه به مدت 3 دقیقه سانتریفیوژ شد.1-2 بار تکرار کنید.

مایع رویی را بگیرید، 0.1 حجم 3mol/L استات سدیم (pH 5.2) و 2.5 برابر حجم اتانول مطلق اضافه کنید تا رسوب اتانول انجام شود.DNA خالص شده را با مقدار مناسب TE حل کنید، محتوا را اندازه گیری کنید و برای استفاده آماده کنید (از آن می توان برای تجزیه و تحلیل ساختار ژن هدف، تهیه پروب و غیره استفاده کرد).

3. بازیابی PCR با ویژگی تقویت خوب

اگر ویژگی تقویت PCR خوب باشد، تنها یک خالص سازی ساده و بازیابی محصول PCR است.می توانید 50 میکروگرم بر میلی لیتر پروتئیناز K را به محصول PCR، 37 درجه به مدت 1 ساعت، یک بار با فنل/کلروفرم استخراج کنید، یک بار با کلروفرم عصاره بگیرید و 0.1 حجم مایع رویی اضافه کنید.استات سدیم با رسوب با 2.5 حجم اتانول مطلق بازیابی شد.

محصولات مرتبط:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/