نسبت پایین A260/A230 معمولاً توسط ناخالصی هایی با حداکثر طول موج جذب در 230 نانومتر ایجاد می شود.بیایید ببینیم این ناخالصی ها شامل چه مواردی هستند:

• آلاینده های رایج	طول موج جذبی	اثر نسبت
  پروتئین	230 نانومتر و 280 نانومتر	کاهش همزمان A260/A 280و A260/A 280نسبت ها
  نمک گوانیدین	220-240 نانومتر	A را کاهش دهید260/A 280نسبت
  فنل	270 نانومتر	-
  تریزول	230 نانومتر و 270 نانومتر	A را کاهش دهید260/A 280نسبت
  EDTA	230 نانومتر	A را کاهش دهید260/A 280نسبت
  اتانول	230-240 نانومتر	A را کاهش دهید260/A 280نسبت

 
 
 
طول موج جذب و مقدار کنتراست آلاینده های رایج

Pآلودگی به روتئین
آلودگی پروتئینی را می توان به عنوان شایع ترین آلودگی در فرآیند استخراج اسید نوکلئیک در نظر گرفت.پروتئین بین فاز آبی بالایی و فاز پایینی وجود داردارگانیک. آلیفاز .آلودگی نسبت A260/A280 و A260/A230 را به طور همزمان کاهش می دهد و نسبت A260/A230 آشکارتر از نسبت A260/A280 تغییر می کند.
در طول بعدیرونویسی معکوسor واکنش های qPCR, باقی مانده های پروتئینی می توانند عملکرد آنزیم را مهار کرده یا با آن تداخل کنند.بهترین راه برای جلوگیری از آلودگی پروتئین این است که در هنگام آسپیراسیون مایع رویی، اصل "به جای کمتر از بیشتر، چند بار مقدار کمی" را در نظر داشته باشید.

2. آلودگی گوانیدینیم
هیدروکلراید (GuHCl) و گوانیدین تیوسیانات (GTC) دارای اثر دناتوره کردن پروتئین‌ها هستند که می‌توانند به سرعت غشای سلولی را در طول فرآیند استخراج اسید نوکلئیک از بین ببرند و باعث دناتوره شدن و رسوب پروتئین شوند.طول موج جذب GuHCl و GTC بین 220-240 نانومتر است ونمک گوانیدینیم باقیمانده نسبت A260/A230 را کاهش می دهد.اگرچه نمک گوانیدینیم باقیمانده نسبت را کاهش می دهد،تأثیر بر آزمایش‌های پایین دست در واقع ناچیز است.

3. آلودگی تریزول
جزء اصلی تریزول فنل است.عملکرد اصلی فنل لیز کردن سلول ها و آزادسازی پروتئین ها و مواد اسید نوکلئیک در سلول ها است.اگرچه فنل می تواند به طور موثر پروتئین ها را دناتوره کند، نمی تواند به طور کامل فعالیت RNase را مهار کند.بنابراین، 8-هیدروکسی کینولین، گوانیدین ایزوتیوسیانات، β- مرکاپتواتانول و غیره به TRIzol اضافه می شوند تا RNase درون زا و اگزوژن را مهار کنند.
تریزول هنگام استخراج RNA سلولی، می‌تواند به سرعت سلول‌ها را لیز کرده و نوکلئاز آزاد شده از سلول‌ها را مهار کند، و تریزول باقی‌مانده نسبت A260/A230 را به میزان قابل توجهی کاهش می‌دهد.
روش فرآوری: هنگام سانتریفیوژ کردن، باید توجه داشت که فنل موجود در تریزول در شرایط 4 درجه و دمای اتاق به راحتی در فاز آب حل می شود.

4. باقی مانده اتانول
اتانول در فرآیند نهایی برای رسوب DNA در حالی که یون‌های نمکی که ممکن است به DNA متصل می‌شوند را حل کند، استفاده می‌شود.طول موج جذب بالاتریناوج جذباتانول نیز در 230-240 نانومتر است کههمچنین نسبت A260/A230 را کاهش می دهد.
روش اجتناب از باقیمانده اتانول را می توان دو بار در طول شستشوی نهایی تکرار کرد، دمیدن درهود بخاربه مدت دو دقیقه تا قبل از افزودن بافر برای شستشو، اتانول کاملاً تبخیر شود.
با این حال، باید دانست که این نسبت تنها یک شاخص ارزیابی کیفیت RNA است.اگر عملیات ذکر شده در بالا به شدت تنظیم شود، انحراف بین نسبت و محدوده استاندارد تأثیر زیادی بر آزمایش‌های پایین دستی نخواهد داشت.
محصولات مرتبط:
کیت جداسازی RNA توتال حیوانات
کیت جداسازی RNA توتال گیاهی
کیت جداسازی RNA توتال سلولی
کیت جداسازی RNA توتال گیاهی پلاس