کیت جداسازی RNA توتال حیوانات کیت های استخراج و خالص سازی RNA کل برای بافت ها و سلول های حیوانی
توضیحات کیت:
استخراج سریع و کارآمد RNA کل با خلوص بالا و با کیفیت بالا از بافت های مختلف حیوانات.
نیازی به نگرانی در مورد تخریب RNA نیست.کل سیستم بدون RNase است
DNA را با استفاده از ستون پاک کننده DNA به طور موثر حذف کنید
حذف DNA بدون افزودن DNase
ساده - تمام عملیات در دمای اتاق کامل می شود
سریع - عملیات را می توان در 30 دقیقه کامل کرد
ایمن - از معرف آلی استفاده نمی شود
خلوص بالا-OD260/280≈1.8-2.1
توضیحات کیت
50 آماده سازی، 200 آماده سازی
این کیت ازستون و فرمول چرخشتوسعه یافته توسط شرکت ما، که می تواند RNA کل با خلوص بالا و با کیفیت بالا را از بافت های حیوانی مختلف با کارایی بالا استخراج کند. یک ستون تمیز کننده DNA کارآمد را ارائه می دهد، که می تواند به راحتی DNA ژنومی را از رویی و لیز بافت جدا و جذب کند، ساده و صرفه جویی در زمان.ستون فقط RNA می تواند به طور موثر RNA را متصل کند و می تواند به طور همزمان با فرمول منحصر به فرد تعداد زیادی نمونه پردازش شود.
کل سیستم بدون RNase است، به طوری که RNA استخراج شده تجزیه نمی شود.بافر RW1، سیستم شستشو بافر بافر RW2، به طوری که RNA بدست آمده عاری از آلودگی پروتئین، DNA، یون و ترکیبات آلی باشد.
اجزای کیت
| کیت جداسازی RNA توتال حیوانات | ||
| اجزای کیت | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 ت | 200 ت | |
| بافر RL1* | 25 میلی لیتر | 100 میلی لیتر |
| بافر RL2 | 15 میلی لیتر | 60 میلی لیتر |
| بافر RW1* | 25 میلی لیتر | 100 میلی لیتر |
| بافر RW2 | 24 میلی لیتر | 96 میلی لیتر |
| ddH2O بدون RNase | 10 میلی لیتر | 40 میلی لیتر |
| ستون فقط RNA | 50 | 200 |
| ستون پاکسازی DNA | 50 | 200 |
| کتابچه راهنمای دستور العمل | 1 قطعه | 1 قطعه |
اطلاعات محصول
| قالب | ستون چرخش | جزء تصفیه | ستون فورژن، معرف |
| شار | 1-24 نمونه | زمان در هر آمادگی | 30 دقیقه (24 نمونه) |
| سانتریفیوژ | سانتریفیوژ رومیزی | جداسازی پیرولیز | جداسازی گریز از مرکز |
| نمونه | بافت حیوانی؛سلول | مقدار نمونه ها | بافت: 10-20 میلی گرم.سلول: (1-5)×106 |
| حجم شستشو | 50-200 میکرولیتر | حداکثر حجم بارگذاری | 850 میکرولیتر |
ویژگی ها و مزایا
■ نیازی به نگرانی در مورد تخریب RNA نیست.کل سیستم بدون RNase است
■ ستون پاک کننده DNA با استفاده از DNA را به طور موثر حذف کنید
■ حذف DNA بدون افزودن DNase
■ ساده همه عملیات در دمای اتاق کامل می شود
■ عملیات سریع را می توان در 30 دقیقه کامل کرد
■ ایمن - بدون نیاز به معرف آلی
■ خلوص بالا -OD260/280≈1.8-2.1
اپلیکیشن کیت
برای استخراج و خالص‌سازی RNA کل از انواع بافت‌های حیوانی تازه یا منجمد یا سلول‌های کشت‌شده مناسب است.
پارامترهای محصول
■ کاربردهای پایین دست: سنتز cDNA رشته اول، RT-PCR، شبیه سازی مولکولی، نورترن بلات و غیره.
■ نمونه ها: بافت های حیوانی، سلول های کشت شده
■ مقدار مصرف: بافت 10-20mg، سلول (2-5)×106
■ حداکثر ظرفیت اتصال DNA ستون خالص سازی: 80 میکروگرم
■ حجم شستشو: 50-200 میکرولیتر
نمودار
کیت جداسازی RNA توتال حیوانی تحت درمان با 20 میلی گرم
نمونه های تازه موش، 5% خالص RNA کل 1% آگار را بگیرید
الکتروفورز گلیکوژن
1: طحال 2: کلیه
3: کبد 4: قلب
ذخیره سازی و ماندگاری
کیت را می توان به مدت 24 ماه در دمای اتاق (15-25 ℃) یا 2-8 ℃ برای مدت طولانی تری نگهداری کرد.بافر RL1 را می توان پس از افزودن β- مرکاپتواتانول (اختیاری) به مدت 1 ماه در دمای 4 ℃ نگهداری کرد.
مقالات ذکر شده
1.IF: 18.808:ژنگ، کیو، کوین، اف.، لو، آر.، و همکاران.نانوذرات لیپیدی بارگذاری شده با mRNA برای ویرایش پایه کبد از طریق بهینه سازی طراحی مرکب مرکزی.Adv.کارکرد.ماتر2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF: 18.187:هی ایکس، هونگ دبلیو، یانگ جی، و همکاران.آپوپتوز خودبخودی سلول ها در آماده سازی سلول های بنیادی درمانی، از طریق آزادسازی فسفاتیدیل سرین، اثرات تعدیل کننده ایمنی را اعمال می کند.هدف انتقال سیگنال در آنجا.2021 ژوئیه 14; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17.97: دای زی، لیو اچ، لیائو جی، و همکاران.اصلاح tRNA N7-Methylguanosine ترجمه mRNA انکوژنی را افزایش می دهد و باعث پیشرفت کلانژیوکارسینوم داخل کبدی می شود.سلول مول.29 ژوئیه 2021:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9.225:Cao X، Shu Y، Chen Y، و همکاران.اصلاح m6A با واسطه Mettl14 با حفظ هموستاز شبکه آندوپلاسمی، بازسازی کبد را تسهیل می کند.سلول مول گاستروانترول هپاتول.2021؛ 12 (2): 633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
کیت های جداسازی RNA برای سایر منابع نمونهدر دسترس هستند:
سلولی، گیاهی، ویروسی، خونی و غیره
RNA استخراج نمی شود یا بازده RNA کم است
اغلب عوامل مختلفی وجود دارد که بر کارایی بازیابی تأثیر می گذارد، مانند: محتوای RNA نمونه بافت، روش کار، حجم شستشو و غیره.
1. حمام یخ یا سانتریفیوژ برودتی (4 درجه سانتیگراد) در طول عملیات انجام شد.
توصیه: در تمام مراحل در دمای اتاق (15-25 درجه سانتیگراد) کار کنید، از حمام یخ خودداری کنید و در دمای پایین سانتریفیوژ کنید.
2. نگهداری نامناسب نمونه یا زمان نگهداری بیش از حد نمونه.
توصیه: نمونه ها را در دمای 80- درجه سانتی گراد نگهداری کنید یا در نیتروژن مایع منجمد کنید و از استفاده مکرر انجماد و ذوب خودداری کنید.سعی کنید از بافت تازه یا سلول های کشت داده شده برای استخراج RNA استفاده کنید.
3. لیز نمونه ناکافی.
توصیه: هنگام همگن سازی بافت، اطمینان حاصل کنید که بافت به اندازه کافی همگن شده است و سلول های بافت به اندازه کافی شکافته شده اند تا آزاد شدن RNA را توضیح دهند.
4. شوینده به درستی اضافه نشده است.
توصیه: تأیید کنید که RNase-Free ddH2O به صورت قطره ای به وسط غشای ستون تصفیه اضافه می شود.
5. حجم صحیح اتانول مطلق به بافر RL2 یا بافر RW2 اضافه نشده است.
توصیه: دستورالعمل ها را دنبال کنید، حجم صحیح اتانول مطلق را به بافر RL2 و بافر RW2 اضافه کنید و قبل از استفاده از کیت خوب مخلوط کنید.
6. دوز نمونه بافت مناسب نیست.
توصیه: از 10-20 میلی گرم بافت یا (1-5) × 10 استفاده کنید6سلول ها در هر 500 میکرولیتر بافر RL1، زیرا استفاده بیش از حد از بافت می تواند منجر به کاهش استخراج RNA شود.
7. حجم شستشو نامناسب یا شستشوی ناقص.
توصیه: حجم شستشوی ستون تصفیه 50-200 میکرولیتر است.اگر اثر شستشو رضایت بخش نباشد، توصیه می شود پس از افزودن ddH بدون RNase از قبل گرم شده، زمان قرارگیری در دمای اتاق را افزایش دهید.2O، به عنوان مثال برای 5-10 دقیقه.
8. ستون تصفیه دارای باقیمانده اتانول پس از شستشو بافر RW2 است.
توصیه: اگر پس از شستشوی بافر RW2 باقیمانده اتانول وجود داشت، سانتریفیوژ لوله خالی را به مدت 1 دقیقه، زمان عملیات سانتریفیوژ لوله خالی را می توان به 2 دقیقه افزایش داد، یا ستون تصفیه را می توان به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار داد تا اتانول باقیمانده به اندازه کافی حذف شود.
RNA خالص تجزیه می شود
کیفیت RNA خالص به عواملی مانند حفظ نمونه، آلودگی RNase و دستکاری و غیره مرتبط است.
1. نمونه های بافت به موقع نگهداری نمی شوند.
توصیه: اگر نمونه های بافتی یا سلول ها پس از جمع آوری به موقع استفاده نشد، بلافاصله در دمای 80- درجه سانتی گراد یا نیتروژن مایع نگهداری شود.برای استخراج RNA، در صورت امکان از بافت یا نمونه سلولی تازه گرفته شده استفاده کنید.
2. انجماد-ذوب مکرر نمونه های بافت.
توصیه: هنگام نگهداری نمونه‌های بافت، بهتر است برای نگهداری آن‌ها را به قطعات کوچک برش دهید و هنگام استفاده از آن‌ها یکی از قطعات را جدا کنید تا از انجماد و ذوب مکرر نمونه و تخریب RNA جلوگیری شود.
3. RNase معرفی شده یا عدم استفاده از دستکش، ماسک و ... در حین عمل.
توصیه: آزمایش‌های استخراج RNA بهتر است در اتاق‌های دستکاری RNA جداگانه انجام شود و جدول قبل از آزمایش پاک شود.
در طول آزمایش از دستکش و ماسک یکبار مصرف استفاده کنید تا تخریب RNA ناشی از معرفی RNase را به حداقل برسانید.
4. معرف ها در حین استفاده به RNase آلوده می شوند.
توصیه: برای آزمایش های مرتبط با کیت جداسازی RNA توتال جانوری جدید جایگزین کنید.
5. لوله های سانتریفیوژ، نوک ها و غیره مورد استفاده در دستکاری RNA به RNase آلوده هستند.
توصیه: مطمئن شوید که لوله‌های سانتریفیوژ، نوک‌ها، پیپت‌ها و غیره مورد استفاده در استخراج RNA همگی فاقد RNase هستند.
RNA به‌دست‌آمده خالص‌شده بر آزمایش‌های پایین دست تأثیر می‌گذارد
RNA خالص شده توسط ستون تصفیه، اگر یون های نمک، محتوای پروتئین بیش از حد بزرگ باشد، آزمایش پایین دست را تحت تاثیر قرار می دهد، مانند: رونویسی معکوس، نورترن بلات و همکاران.
1. RNA شسته شده دارای بقایای یون نمک است.
توصیه: تأیید کنید که حجم صحیح اتانول به بافر RW2 اضافه شده است و 2 شستشوی ستون تصفیه را با سرعت گریز از مرکز نشان داده شده برای عملیات انجام دهید.در صورت وجود باقیمانده یون نمک، ستون تصفیه را به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق در بافر RW2 بگذارید و سانتریفیوژ را انجام دهید تا آلودگی نمک را به حداکثر برسانید.
2. باقی مانده اتانول در RNA شسته شده.
توصیه: اطمینان حاصل کنید که پس از شستشوی بافر RW2، عملیات سانتریفیوژ لوله خالی را با سرعت سانتریفیوژ نشان داده شده انجام دهید، اگر هنوز باقیمانده اتانول وجود دارد، زمان عملیات سانتریفیوژ لوله خالی را به 2 دقیقه افزایش دهید، یا پس از سانتریفیوژ لوله خالی به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق بگذارید تا حذف اتانول به حداکثر برسد.
