کیت جداسازی DNA سواب باکال/کارت FTA کیت استخراج یا تصفیه DNA ژنومی از سواب های باکال
توضیحات کیت:
به سرعت DNA ژنومی با کیفیت بالا را از نمونه‌های سواب باکال/کارت FTA خالص کنید.
◮بدون آلودگی RNase:ستون DNA-Only ارائه شده توسط کیت، حذف RNA را از DNA ژنومی بدون افزودن RNase در طول آزمایش ممکن می سازد و از آلوده شدن آزمایشگاه به RNase اگزوژن جلوگیری می کند.
◮سرعت سریع:پروتئاز Foregene فعالیت بالاتری نسبت به پروتئازهای مشابه دارد و نمونه های بافت را به سرعت هضم می کند.این عملیات ساده است و عملیات استخراج DNA ژنومی را می توان در عرض 20-80 دقیقه تکمیل کرد.
◮راحت:سانتریفیوژ در دمای اتاق انجام می شود و نیازی به سانتریفیوژ 4 درجه سانتی گراد در دمای پایین یا رسوب اتانول DNA نیست.
◮ایمنی:نیازی به استخراج معرف آلی نیست.
◮کیفیت بالا:DNA ژنومی استخراج شده دارای قطعات بزرگ، بدون RNA، بدون RNase و محتوای یون بسیار کم است که می تواند نیازهای آزمایش های مختلف را برآورده کند.
◮سیستم میکرو شستشو:این می تواند غلظت DNA ژنومی را افزایش دهد، که برای تشخیص یا آزمایش پایین دست راحت است.
شرح
این کیت یک روش کارآمد و سریع برای به دست آوردن DNA ژنومی با غلظت بالا از سواب های باکال و کارت FTA (لکه های خون) ارائه می دهد.با استفاده از شرکت ما'ستون و فرمول منحصربفرد اسپین غشای سیلیکا فقط با DNA، همراه با پروتئاز Foregene، DNA ژنومی با غلظت بالا و با کیفیت بالا را می توان در 80 دقیقه استخراج کرد.ستون تصفیه کوچک طراحی شده به DNA ژنومی متصل می شود و DNA را می توان با مقدار کمی شستشو داد.15μl) سیستم شستشو برای افزایش غلظت DNA ژنومی به دست آمده، که برای تشخیص یا آزمایش پایین دست مناسب است.این کیت می تواند یک یا چند نمونه را در یک زمان پردازش کند و فرآیند تصفیه نیازی به استخراج مواد آلی مانند فنل، کلروفرم و ایزوپروپانول یا رسوب اتانول وقت گیر ندارد و عملیات ساده و صرفه جویی در زمان است.
مشخصات فنی
50 آماده سازی
اجزای کیت
| بافر ST1 |
| بافر ST2 |
| آکریل آمید خطی |
| بافر PW |
| بافر WB |
| بافر EB |
| پروتئاز Foregene |
| ستون فقط DNA |
| دستورالعمل ها |
ویژگی ها و مزایا
-عدم آلودگی RNase: ستون فقط DNA ارائه شده توسط کیت، حذف RNA از DNA ژنومی را بدون افزودن RNase در طول آزمایش ممکن می سازد و از آلوده شدن آزمایشگاه به RNase اگزوژن جلوگیری می کند.
-سرعت سریع: Foregene Protease فعالیت بالاتری نسبت به پروتئازهای مشابه دارد، نمونه ها را به سرعت هضم می کند.عملیات ساده
- راحت: سانتریفیوژ در دمای اتاق انجام می شود و نیازی به سانتریفیوژ ۴ درجه سانتی گراد در دمای پایین یا رسوب اتانول DNA نیست.
-ایمنی: نیازی به استخراج معرف آلی نیست.
-کیفیت بالا: DNA ژنومی استخراج شده دارای قطعات بزرگ، بدون RNA، بدون RNase و محتوای یون بسیار کم است که می تواند نیازهای آزمایش های مختلف را برآورده کند.
سیستم میکرو شستشو: می تواند غلظت DNA ژنومی را افزایش دهد که برای تشخیص یا آزمایش پایین دست راحت است.
اپلیکیشن کیت
برای خالص‌سازی DNA ژنومی از نمونه‌های زیر مناسب است: سواب باکال، کارت FTA (لکه‌های خون).
ذخیره سازی و ماندگاری
-این کیت را می توان به مدت 12 ماه در شرایط خشک در دمای اتاق (15-25 درجه سانتیگراد) نگهداری کرد.در صورت نیاز به نگهداری طولانی تری می توان آن را در دمای 2-8 درجه سانتی گراد نگهداری کرد.
نکته: اگر محلول در دمای پایین نگهداری شود مستعد بارش است.قبل از استفاده حتما محلول را برای مدتی در کیت در دمای اتاق قرار دهید.در صورت لزوم، آن را به مدت 10 دقیقه در حمام آب 37 درجه سانتیگراد گرم کنید تا رسوب حل شود و قبل از استفاده آن را مخلوط کنید.
-محلول Foregene Protease دارای فرمول منحصر به فردی است که وقتی در دمای اتاق به مدت طولانی (3 ماه) نگهداری می شود فعال است.فعالیت و پایداری آن در دمای 4 درجه سانتی گراد بهتر خواهد بود، بنابراین توصیه می شود آن را در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری کنید، به یاد داشته باشید که آن را در دمای -20 درجه سانتی گراد نگهداری نکنید.
ستون تصفیه مسدود شده است
در این کیت در عملیات استخراج DNA ژنومی، ستون خالص سازی مستقیماً روی مخلوط لیز آنزیمی نمونه بدون مرحله سانتریفیوژ جذب می شود و ممکن است به دلیل آنزیم سازی ناقص و ویسکوزیته بالای نمونه، ستون تصفیه مسدود شود.
علل احتمالی زیر به شرح زیر است:
1. هضم آنزیمی ناقص نمونه های بافت.
توصیه: زمان پردازش نمونه Foregene Protease را می توان به طور مناسب افزایش داد یا مایع رویی را پس از سانتریفیوژ در 12000 دور در دقیقه (~13400 × گرم) به مدت 5 دقیقه گرفت.
2. استفاده بیش از حد از نمونه های بافت یا بافت های بزرگ.
توصیه: بهتر است از 1 سواب باکال در نمونه تجاوز نکنید.اگر نمونه خیلی بزرگ است، دوز بافر ST1، پروتئاز Foregene، بافر ST2 را بر این اساس افزایش دهید.
3. ویسکوزیته نمونه خیلی زیاد است.
توصیه: نمونه ها را می توان به طور مناسب با 10 میلی مولار Tris-HCl قبل از استخراج DNA ژنومی رقیق کرد.
4. قطعات کارت خون مکیده شده است.
توصیه: زمان سانتریفیوژ گذرا مرحله 6 استخراج ژنومی لکه خون (کارت FTA) را می توان به طور مناسب افزایش داد.
عملکرد کم یا بدون DNA
اغلب عوامل مختلفی وجود دارد که بر عملکرد DNA ژنومی تأثیر می گذارد، از جمله منشاء نمونه، شرایط نگهداری نمونه، آماده سازی نمونه، دستکاری و غیره.
DNA ژنومی را نمی توان در طول استخراج به دست آورد
علل احتمالی به شرح زیر است:
1. نگهداری نادرست نمونه ها یا نگهداری طولانی مدت منجر به تخریب DNA ژنومی می شود.
توصیه: سواب های خوراکی ترجیحاً باید تازه نمونه برداری شوند و استفاده از سواب های نگهداری شده برای عملیات استخراج DNA ژنومی توصیه نمی شود.نمونه های لکه خون باید اطمینان حاصل کنند که کیفیت آن مناسب است و زمان نگهداری نباید خیلی طولانی باشد.
2. استفاده بسیار کم از بافت ممکن است منجر به عدم استخراج DNA ژنومی مربوطه شود.
توصیه: دستورالعمل های نمونه برداری از سواب باکال را در راهنمای عمل دنبال کنید و تا حد امکان پاک کنید تا سلول های کافی برای استخراج DNA ژنومی به سواب دهانی متصل شوند.برای استخراج نمونه لکه خون، می توان ناحیه برش لکه خون را به طور مناسب افزایش داد.
3. Foregene Protease به طور نامناسب حفظ می شود و در نتیجه فعالیت آن کاهش می یابد یا غیرفعال می شود.
توصیه: شرایط ذخیره سازی Foregene Protease را تأیید کنید یا آن را با یک Foregene Protease جدید برای واکنش آنزیمی جایگزین کنید.
4. نگهداری نادرست کیت یا زمان نگهداری بیش از حد طولانی است و در نتیجه برخی از اجزای کیت خراب می شوند.
توصیه: یک کیت جداسازی DNA سواب باکال جدید برای روش های مرتبط خریداری کنید.
5. بافر WB اتانول مطلق اضافه نمی کند.
توصیه: تأیید کنید که بافر WB حجم صحیح اتانول مطلق را اضافه می کند.
6. ماده شوینده به درستی به فیلم سیلیکونی اضافه نشده است.
توصیه: قطره های شوینده از قبل گرم شده 65 درجه سانتی گراد را به وسط غشای سیلیکونی اضافه کنید و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق بگذارید تا راندمان شستشو افزایش یابد.
DNA ژنومی کم بازده جداسازی شد
علل احتمالی زیر به شرح زیر است:
1. نگهداری نادرست نمونه ها یا نگهداری طولانی مدت منجر به تخریب DNA ژنومی می شود.
توصیه: سواب های خوراکی ترجیحاً تازه نمونه برداری شوند و سواب های نگهداری شده نباید برای استخراج DNA ژنومی استفاده شوند.
2. اگر مقدار نمونه بافت خیلی کم باشد، محتوای DNA ژنومی استخراج شده کمتر خواهد بود.
توصیه: دستورالعمل های نمونه برداری از سواب خوراکی در راهنمای عمل را دنبال کنید، تا جایی که ممکن است پاک کنید تا سلول های کافی برای استخراج DNA ژنومی به سواب دهان متصل شود.
3. Foregene Protease به طور نامناسب حفظ می شود و در نتیجه فعالیت آن کاهش می یابد یا غیرفعال می شود.
توصیه: شرایط ذخیره سازی Foregene Protease را تأیید کنید یا آن را با یک Foregene Protease جدید برای واکنش آنزیمی جایگزین کنید.
4. مشکلات شوینده.
توصیه: از بافر EB برای شستشو استفاده کنید.در صورت استفاده از ddH2O یا سایر شوینده ها، تأیید کنید که pH محلول شستشو بین 7.0-8.5 است.
5. محلول به صورت قطره ای به درستی اضافه نشده است.
توصیه: قطره های شوینده را به وسط غشای سیلیکونی اضافه کنید و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق بگذارید تا کارایی شستشو افزایش یابد.
6. مایع شستشو خیلی کم جمع می شود.
توصیه: از شوینده برای شستشوی DNA ژنومی همانطور که در دستورالعمل نیاز است، حداقل حداقل 15 میکرولیتر استفاده کنید.
خلوص پایین DNA ژنومی جدا شده
خلوص DNA ژنومی پایین می تواند منجر به شکست یا نتایج نامطلوب آزمایشات پایین دست شود، مانند: آنزیم ها نمی توانند باز شوند، PCR نمی تواند قطعه ژن مورد نظر را بدست آورد و غیره.
علل احتمالی به شرح زیر است:
1. آلودگی هتروپروتئین، آلودگی RNA.
تجزیه و تحلیل: ستون تصفیه با استفاده از بافر PW شسته نشد.ستون تصفیه شستشو بافر PW با استفاده از سرعت گریز از مرکز شسته نشد.
توصیه: قبل از افزودن اتانول از عدم وجود رسوب در مایع رویی اطمینان حاصل کنید.حتما ستون تصفیه را طبق دستورالعمل بشویید و این مرحله قابل حذف نیست.
2. آلودگی یونی ناخالصی.
تجزیه و تحلیل: ستون تصفیه شستشوی بافر WB تنها یک بار حذف یا شسته شد که منجر به آلودگی یونی باقیمانده شد.
توصیه: حتماً بافر WB را 2 بار طبق دستور شستشو دهید تا یون های باقیمانده تا حد امکان حذف شوند.
3. آلودگی آنزیم RNA.
تجزیه و تحلیل: RNaseهای خارجی به بافر اضافه شدند.عملیات شستشوی بافر PW نادرست بود، که منجر به باقیمانده‌های RNase شد که بر عملیات آزمایشی RNA پایین دست، مانند رونویسی آزمایشگاهی، تأثیر گذاشت.
توصیه: کیت‌های جداسازی اسید نوکلئیک سری Foregene می‌توانند RNA را بدون افزودن RNase حذف کنند، بنابراین کیت جداسازی DNA کارت سواب باکال/FTA نیازی به افزودن RNase ندارد.حتماً دستورالعمل های ستون تصفیه شستشوی Buffer PW را دنبال کنید و این مرحله را نمی توان حذف کرد.
4. باقی مانده اتانول.
تجزیه و تحلیل: بافر WB پس از شستشوی ستون تصفیه، سانتریفیوژ لوله خالی را انجام نداد.
توصیه: عمل سانتریفیوژ لوله خالی را طبق دستورالعمل صحیح انجام دهید.
5. سایر آلودگی های ناخالصی.
تجزیه و تحلیل: نمونه های ذخیره شده یا نمونه های خاص از قبل درمان نمی شوند.
توصیه: نمونه را طبق دستورالعمل کاملاً از قبل آماده کنید.
