به قرارداد پایبند باشید»، مطابق با نیاز بازار است، با کیفیت خوب خود به رقابت در بازار می پیوندد و همچنین پشتیبانی جامع تر و عالی را برای مشتریان فراهم می کند تا به آنها اجازه دهد برنده بزرگی شوند.پیگیری این شرکت، قطعاً مایه خرسندی مشتریان برای چین محصول جدید پرفروش ترین کیت استخراج ویروسی DNA و Rna است، ما تجارت خود را در آلمان، ترکیه، کانادا، ایالات متحده آمریکا، اندونزی، هند، نیجریه، برزیل و برخی مناطق دیگر جهان گسترش داده ایم.ما سخت کار می کنیم تا یکی از بهترین تامین کنندگان جهانی باشیم.
به قرارداد پایبند باشید»، مطابق با نیاز بازار است، با کیفیت خوب خود به رقابت در بازار می پیوندد و همچنین پشتیبانی جامع تر و عالی را برای مشتریان فراهم می کند تا به آنها اجازه دهد برنده بزرگی شوند.پیگیری شرکت، قطعاً مایه رضایت مشتریان استکیت استخراج RNA و DNA چین و استخراج اسید نوکلئیک، ما مشتاقانه منتظر ایجاد یک رابطه سودمند متقابل با شما هستیم که بر اساس محصولات و راه حل های با کیفیت بالا، قیمت های مناسب و بهترین خدمات است.امیدواریم محصولات ما تجربه ای خوشایند را برای شما به ارمغان بیاورند و حس زیبایی را به همراه داشته باشند.
دفترچه راهنما:راهنمای دستورالعمل Plant Total RNA Isolation Kit Plus

به قرارداد پایبند باشید»، مطابق با نیاز بازار است، با کیفیت خوب خود به رقابت در بازار می پیوندد و همچنین پشتیبانی جامع تر و عالی را برای مشتریان فراهم می کند تا به آنها اجازه دهد برنده بزرگی شوند.پیگیری این شرکت، قطعاً مایه خرسندی مشتریان برای چین محصول جدید پرفروش ترین کیت استخراج ویروسی DNA و Rna است، ما تجارت خود را در آلمان، ترکیه، کانادا، ایالات متحده آمریکا، اندونزی، هند، نیجریه، برزیل و برخی مناطق دیگر جهان گسترش داده ایم.ما سخت کار می کنیم تا یکی از بهترین تامین کنندگان جهانی باشیم.
محصول جدید چین کیت استخراج Rna&DNA و استخراج اسید نوکلئیک چین، ما مشتاقانه منتظر ایجاد یک رابطه سودمند متقابل با شما بر اساس محصولات و راه حل های با کیفیت بالا، قیمت های مناسب و بهترین خدمات هستیم.امیدواریم محصولات ما تجربه ای خوشایند را برای شما به ارمغان بیاورند و حس زیبایی را به همراه داشته باشند.

ستون وصل شد

پس از وصل شدن ستون، بازده RNA کاهش می یابد یا حتی تصفیه RNA غیرممکن است و جرم RNA بدست آمده کم است.

تجزیه و تحلیل علت رایج:

1. نمونه استراحت کامل نیست.

شکستن نمونه به طور کامل باعث مسدود شدن ستون پاک کننده DNA نمی شود، در حالی که بر عملکرد و کیفیت RNA تأثیر می گذارد.هنگام شکستن نمونه ها، عملیات آسیاب سریع در نیتروژن مایع کافی را توصیه می کنیم، سعی کنید دیواره سلولی نمونه، غشای سلولی و سایر بافت ها را خرد کنید.برای نمونه های گیاهی پلی ساکاریدهای پلیول، توصیه می کنیم از Plant Total RNA ISOOLATION KIT PLUS استفاده کنید.

2. هنگام مکش رویی نمونه جدا شده با ستون پاک کننده DNA، ممکن است رسوب تکه تکه شده سلولی استنشاق شود.

رسوبات تکه تکه شده سلولی باعث ایجاد ستون RNA-ONLY می شود که هنگام انجام عملیات جذب RNA مسدود می شود (مرحله 6 را ببینید).توصیه می کنیم هنگام مکش این مایع رویی به دقت به منظور جلوگیری از مکیدن بقایای سلولی دقت کنید.

3. مقدار اولیه نمونه خیلی زیاد است.

استفاده بیش از حد از نمونه منجر به تکه تکه شدن نمونه ناقص یا لیز ناقص سلول توسط بافر PSL1 می شود و در نتیجه ستون تصفیه در طول تصفیه مسدود می شود.کیت جداسازی RNA توتال گیاهی هر نمونه عملیاتی خالص 50 میلی گرم است.برای نمونه های گیاهی پلی ساکاریدهای پلیول، توصیه می کنیم که Plant Total RNA ISOOLATION KIT PLUS را امتحان کنید.

4. دمای سانتریفیوژ خیلی پایین است.

کل فرآیند جداسازی و خالص سازی RNA در دمای اتاق (20-25) انجام می شود°ج) با این تفاوت که بافت نمونه توسط نیتروژن مایع شکسته می شود. دمای برخی از سانتریفیوژهای برودتی کمتر از 20 است.℃که ممکن است باعث انسداد ستون پاک کننده DNA و/یا ستون فقط RNA شود.اگر این اتفاق افتاد، دمای سانتریفیوژ را روی 20-25 تنظیم کنید℃، ومطمئن شوید که مخلوط لیز و/یا مایع رویی اضافه شده به اتانول از قبل تا 37 گرم شده است.°C.

هیچ RNA استخراج نشده یا بازده RNA کم است

معمولاً عوامل زیادی بر راندمان بازیابی تأثیر می گذارند، مانند: محتوای RNA نمونه، روش عملیات، حجم شستشو و غیره.

تجزیه و تحلیل علل شایع به شرح زیر:

1. حمام یخ یا سانتریفیوژ با دمای پایین (4 درجه سانتیگراد) در طول عملیات انجام شد.

پیشنهاد: در دمای اتاق (15-25) کار کنید°ج) در کل فرآیند، حمام یخ و سانتریفیوژ با دمای پایین را انجام ندهید.

2. RNA به دلیل نگهداری نادرست نمونه یا نگهداری طولانی مدت نمونه تخریب شده است.

توصیه: نمونه های تازه جمع آوری شده باید به سرعت در نیتروژن مایع منجمد شوند و سپس در دمای 80- درجه سانتیگراد برای مدت طولانی نگهداری شوند، از انجماد و ذوب مکرر نمونه ها جلوگیری شود.یا بلافاصله نمونه ها را در محلول تثبیت کننده RNA RNAlater (نمونه های حیوانی) خیس کنید.

3. قطعه قطعه شدن و لیز ناکافی نمونه منجر به انسداد ستون تصفیه می شود.

پیشنهاد: هنگام آسیاب کردن بافت، لطفاً مطمئن شوید که بافت به اندازه کافی آسیاب شده است و به سرعت آن را به بافر PSL1 از پیش آماده شده منتقل کنید (تأیید کنید که نسبت صحیح β-ME اضافه شده است، مرحله 1 روش را ببینید).

4. شوینده به اشتباه اضافه شده است.

پیشنهاد: مطمئن شوید که ddH2O بدون RNase به وسط غشای ستون تصفیه چکه می‌کند.

5. حجم صحیح اتانول مطلق به بافر PSL2 یا بافر PRW2 اضافه نشده است.

پیشنهاد: لطفاً دستورالعمل ها را دنبال کنید، حجم صحیح اتانول مطلق را به بافر PSL2 و بافر PRW2 اضافه کنید و قبل از استفاده از کیت خوب مخلوط کنید.

6. مقدار نمونه بافت نامناسب است.

پیشنهاد: از 50 میلی گرم بافت در هر 500 میکرولیتر بافر PSL1 استفاده کنید.استفاده بیش از حد از بافت مقدار RNA استخراج شده را کاهش می دهد و خلوص RNA حاصل نیز کاهش می یابد.ما قویاً توصیه می کنیم که دوز اولیه نمونه نباید از 50 میلی گرم در هر عملیات استخراج RNA تجاوز کند.

7. حجم شستشو نامناسب یا شستشوی ناقص.

پیشنهاد: حجم شوینده ستون تصفیه 50-200 میکرولیتر است.اگر اثر شستشو رضایت بخش نباشد، توصیه می شود پس از افزودن ddH2O بدون RNase از قبل گرم شده، مانند 5-10 دقیقه، زمان را در دمای اتاق افزایش دهید.

8. ستون تصفیه پس از شستشو با BufferPRW2 دارای باقیمانده اتانول است.

پیشنهاد: اگر لوله خالی به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ شود و پس از شستشو در بافر PRW2 هنوز اتانول باقی مانده است، می توانید زمان سانتریفیوژ لوله خالی را به 2 دقیقه افزایش دهید یا ستون تصفیه را به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید تا اتانول باقیمانده به طور کامل حذف شود.

9. کیت اشتباه استفاده شده است.

پیشنهاد: برای نمونه های گیاهی پلی ساکاریدهای پلی فنلی، استفاده از کیت های رایج مانند کیت جداسازی RNA توتال گیاهی ممکن است نتواند نمونه های RNA ایده آل را به دست آورد.ما به شما توصیه می کنیم از Plant Total RNA IsolationKit Plus استفاده کنید که به طور ویژه برای نمونه های گیاهی پلی ساکارید پلی فنولیک طراحی شده است.کیت ویژه ای برای استخراج RNA از نمونه های گیاهی پلی فنل و پلی ساکارید.

مقدار OD260/OD280 کم است

شستشوی RNA با ddH2O و استفاده برای قرائت های اسپکتروفتومتر منجر به مقادیر کم OD260/OD280 می شود.توصیه می‌کنیم از 10 میلی‌مولار Tris-HCl، pH 7.5 (به‌جای ddH2O بدون RNase برای شستشوی RNA) برای بدست آوردن مقادیر نسبتاً صحیح OD260/OD280 استفاده کنید، به «آزمایش‌های غلظت و تصفیه RNA» در صفحه 19 مراجعه کنید.

RNA خالص شده تجزیه می شود

کیفیت RNA خالص به عواملی مانند نگهداری نمونه، آلودگی RNase و دستکاری مرتبط است.

تجزیه و تحلیل علل شایع:

1. نمونه های بافت پس از جمع آوری به موقع نگهداری نشدند.

توصیه: اگر نمونه‌های بافتی پس از جمع‌آوری به موقع استفاده نشد، لطفاً بلافاصله آن‌ها را در نیتروژن مایع در دمای پایین نگهداری کنید یا پس از انجماد سریع در نیتروژن مایع برای نگهداری طولانی‌مدت به -۸۰ درجه سانتی‌گراد انتقال دهید یا بلافاصله نمونه‌ها را در محلول تثبیت‌کننده RNA RNAlater (نمونه‌های حیوانی) غوطه‌ور کنید.برای استخراج RNA سعی کنید از نمونه های بافت تازه جمع آوری شده استفاده کنید.

2. انجماد و ذوب مکرر نمونه های بافت.

پیشنهاد: هنگام نگهداری نمونه‌های بافت، بهتر است آن‌ها را برای نگهداری به قطعات کوچک برش دهید و هنگام استفاده از آن‌ها بخشی از آن‌ها را خارج کنید تا از تخریب RNA ناشی از انجماد و ذوب مکرر نمونه‌ها جلوگیری شود.

3. RNase در اتاق عمل وارد می شود یا از دستکش یکبار مصرف، ماسک و غیره استفاده نمی شود.

پیشنهاد: آزمایشات استخراج RNA بهتر است در عملیات RNA جداگانه انجام شود و میز آزمایشگاه باید قبل از آزمایش تمیز شود و در طول آزمایش از دستکش و ماسک یکبار مصرف استفاده شود تا از تخریب RNA ناشی از معرفی RNase تا حد زیادی جلوگیری شود.

4. معرف در طول استفاده توسط RNase آلوده می شود.

پیشنهاد: با یک سری جدید از کیت های استخراج RNA کل گیاه برای آزمایش های مرتبط جایگزین کنید.

5. لوله های سانتریفیوژ و نوک پیپت های مورد استفاده برای دستکاری RNA به RNase آلوده هستند.

پیشنهاد: مطمئن شوید که لوله های سانتریفیوژ، نوک پیپت، پیپت ها و غیره مورد استفاده در استخراج RNA همگی فاقد RNase هستند.

دفترچه راهنما:

راهنمای دستورالعمل Plant Total RNA Isolation Kit Plus