راهنمای تجزیه و تحلیل مشکلات

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

هیچ RNA قابل استخراج نیست یا بازده اسید نوکلئیک پایین است

معمولاً عوامل زیادی بر راندمان بازیابی تأثیر می گذارند، مانند: محتوای RNA نمونه، روش کار، حجم شستشو و غیره.

تجزیه و تحلیل علل شایع:

1.حمام یخ یا سانتریفیوژ در دمای پایین (4 درجه سانتیگراد) در حین کار.

پیشنهاد: عملیات دمای اتاق (15-25 درجه سانتیگراد)، هرگز حمام یخ و سانتریفیوژ با دمای پایین انجام نشود.

2. ذخیره سازی نامناسب نمونه یا ذخیره سازی نمونه برای مدت طولانی.

پیشنهاد: نمونه ها را در دمای 80- درجه سانتیگراد نگهداری کنید یا در نیتروژن مایع منجمد کنید و از استفاده مکرر انجماد و ذوب خودداری کنید.سعی کنید از نمونه های تازه جمع آوری شده برای استخراج RNA استفاده کنید.

3. لیز نمونه ناکافی

توصیه: لطفاً مطمئن شوید که نمونه و محلول کار (آکریل آمید خطی) کاملاً مخلوط شده و به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق (15-25 درجه سانتیگراد) انکوبه شده است.

4. شوینده به اشتباه اضافه شده است

توصیه: مطمئن شوید که ddH2O بدون RNase به وسط غشای ستون تصفیه اضافه شده است.

5. حجم نامناسب اتانول بی آب در بافر viRW2

پیشنهاد: لطفاً دستورالعمل ها را دنبال کنید، حجم صحیح اتانول بدون آب را به بافر viRW2 اضافه کنید و قبل از استفاده از کیت آن ها را به خوبی مخلوط کنید.

6. استفاده نادرست از نمونه

پیشنهاد: 200 میکرولیتر نمونه در هر 500 میکرولیتر بافر viRL.حجم نمونه بیش از حد منجر به کاهش سرعت استخراج RNA می شود.

7. حجم شستشو نامناسب یا شستشوی ناقص.

پیشنهاد: حجم شوینده ستون تصفیه 30-50μl است.اگر اثر شستشو رضایت بخش نباشد، توصیه می شود ddH بدون RNase از قبل گرم شده اضافه شود.₂O و زمان قرار دادن در دمای اتاق، مانند 5-10 دقیقه را افزایش دهید

8. ستون خالص دارای باقیمانده اتانول پس از شستشو در بافر viRW2 است.

پیشنهاد: اگر اتانول پس از شستشو در بافر viRW2 و سانتریفیوژ لوله خالی به مدت 2 دقیقه همچنان باقی می ماند، ستون تصفیه را می توان پس از سانتریفیوژ در لوله خالی به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق رها کرد تا اتانول باقیمانده به طور کامل حذف شود.

تخریب مولکول های RNA خالص

کیفیت RNA خالص شده به عواملی مانند ذخیره سازی نمونه، آلودگی RNase و عملکرد مرتبط است.

تجزیه و تحلیل علل شایع:

1. نمونه های جمع آوری شده به موقع ذخیره نشدند.

پیشنهاد: اگر نمونه پس از جمع آوری به موقع استفاده نشد، لطفاً بلافاصله آن را در دمای -80 ℃ یا نیتروژن مایع نگهداری کنید.برای استخراج مولکول های RNA، سعی کنید تا حد امکان از نمونه های تازه جمع آوری شده استفاده کنید.

2. نمونه های جمع آوری شده به طور مکرر منجمد و ذوب شدند.

پیشنهاد: از انجماد و ذوب مکرر (بیش از یک بار) در طول جمع آوری و نگهداری نمونه خودداری کنید، در غیر این صورت بازده اسید نوکلئیک کاهش می یابد.

3. RNase در اتاق عمل وارد شده و یا از دستکش، ماسک و غیره یکبار مصرف استفاده نشده است.

پیشنهاد: آزمایش استخراج مولکول‌های RNA بهتر است در اتاق عمل جداگانه RNA انجام شود و جدول آزمایش قبل از آزمایش تمیز شود.در طول آزمایش از دستکش و ماسک یکبار مصرف استفاده کنید تا از تخریب RNA ناشی از معرفی RNase جلوگیری کنید.

4. معرف در طول استفاده توسط RNase آلوده می شود.

پیشنهاد: برای آزمایش‌های مرتبط، کیت جدید جداسازی RNA ویروسی را جایگزین کنید.

5. آلودگی RNase لوله های سانتریفیوژ، نوک پیپت ها و غیره. پیشنهاد: مطمئن شوید که لوله های سانتریفیوژ، نوک پیپت ها و پیپت ها همگی فاقد RNase هستند.

مولکول های RNA خالص بر آزمایش های پایین دست تأثیر گذاشتند

مولکول‌های RNA که توسط ستون تصفیه خالص‌سازی می‌شوند، اگر یون‌ها یا پروتئین‌های نمک بیش از حد وجود داشته باشند، مانند: رونویسی معکوس، شمال بلات و غیره، آزمایش‌های پایین دستی را تحت تأثیر قرار خواهند داد.

1. یون های نمک باقی مانده در مولکول های RNA شسته شده وجود دارد.

توصیه: مطمئن شوید که حجم صحیح اتانول بی آب به بافر viRW2 اضافه شده است و ستون تصفیه را دو بار مطابق با سرعت سانتریفیوژ صحیح در دستورالعمل های عملیاتی بشویید. اگر هنوز یون های نمک باقی مانده است، می توانید بافر viRW2 را به ستون تصفیه اضافه کنید و آن را به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق بگذارید.سپس سانتریفیوژ را انجام دهید تا آلودگی یون های نمک را تا حد زیادی از بین ببرید

2. اتانول باقی مانده در مولکول های RNA شسته شده وجود دارد

پیشنهاد: پس از تأیید اینکه ستون های تصفیه توسط بافر viRW2 شسته شده اند، سانتریفیوژ لوله خالی را مطابق با سرعت گریز از مرکز در دستورالعمل های عملیاتی انجام دهید.اگر هنوز اتانول باقی مانده است، می توان آن را به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق پس از سانتریفیوژ کردن در لوله خالی گذاشت تا اتانول باقی مانده را تا حد زیادی حذف کند.

دفترچه راهنما:

راهنمای دستورالعمل کیت جداسازی RNA ویروسی