Foreasy HS Taq DNA Polymerase
توضیحات کیت:
◮ویژگی بالا: آنزیمی با فعالیت شروع داغ بالا.
◮تقویت سریع: 10 ثانیه در کیلوبایت
◮سازگاری قالب بالا: می توان از آن برای تقویت کارآمد High استفاده کردGCارزشوالگوهای مختلف DNA با تکثیر دشوار.
◮وفاداری قوی: وفاداری 6 برابر استof آنزیم Taq معمولی
شرح
Foreasy HS Taq DNA Polymerase یک آنزیم Taq جدید است که در باکتری های مهندسی اشریشیا کلی با فناوری نوترکیبی ژن بیان می شود.پس از اینکه آنزیم با یک فرآیند خاص درمان شد، آن را'فعالیت s قبل از فعال سازی حرارتی مهار می شود، در نتیجه از تقویت غیر اختصاصی ناشی از بازپخت غیر اختصاصی پرایمرها یا دایمرهای پرایمر در شرایط دمای پایین جلوگیری می شود.این محصول برای PCR React بسیار اختصاصی مناسب استیون، M ultiple x PCR ، محتوای GC بالا (> 60٪) ،باساختار ثانویهیا دیگرژنوم پس زمینه قویicsتکثیر و ژنوم در مقیاس بزرگicsتشخیص تقویتاین آنزیم دارای فعالیت اگزونوکلئاز 5' → 3' DNA پلیمراز و فعالیت اگزونوکلئاز 5' → 3' است، اما فعالیت اگزونوکلئاز 3' → 5' ندارد.
اجزای کیت
| جزء | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 5000 U (1 میلی لیتر) | 50 KU (10 میلی لیتر) | 500 KU (100 میلی لیتر) |
| 2× بافر واکنش Taq | 25 میلی لیتر × 5 | 250 میلی لیتر × 5 | 500 میلی لیتر × 25 |
ویژگی ها و مزایا
- ویژگی بالا: آنزیمی با فعالیت شروع داغ بالا.
- تقویت سریع: 10 ثانیه در کیلوبایت.
- سازگاری قالب بالا: می توان از آن برای تقویت کارآمد High استفاده کردGCارزشوالگوهای مختلف DNA با تکثیر دشوار.
- وفاداری قوی: وفاداری 6 برابر استof آنزیم Taq معمولی
اپلیکیشن کیت
- سیستم های مختلف PCR/qPCR و سیستم مستقیم PCR
- PCR تکثیر شده DNA
- علامت DNA
- توالی یابی DNA
- PCR به علاوه A tail
تعریف فعالیت
1U: مقدار آنزیم مورد نیاز برای ترکیب 10 نانومولDNAبه مواد نامحلول در اسید با استفاده از DNA فعال اسپرم ماهی قزل آلا به عنوان الگو / آغازگر، 74 درجه سانتیگراد، 30 دقیقه.
شرایط واکنش
| درجه حرارت | زمان پاسخ | زمان چرخه |
| 37 درجه سانتی گراد | 5 دقیقه | 1 |
| 94 درجه سانتی گراد | 5 دقیقه | 1 |
| 94 درجه سانتی گراد | 10 ثانیه | 40 |
| 60 درجه سانتی گراد | 10 ثانیه |
توجه داشته باشید:برای سیستم های 10 میکرولیتری و 20 میکرولیتری، اگر سیکلر حرارتی درب حرارتی ندارد، به حجم مساوی روغن معدنی اضافه کنید.
شرایط واکنش PCR بسته به شرایط ساختاری قالب ها، پرایمرها و موارد مشابه متفاوت است.در عملیات خاص، لازم است با توجه به شرایط خاص مانند نوع قالب، اندازه قطعه هدف، توالی پایه قطعه تقویت شده و محتوای GC و طول پرایمر، شرایط بهینه واکنش شامل دمای بازپخت، زمان گسترش و غیره طراحی شود.
ذخیره سازی
-20 ± 5 درجه سانتیگراد به مدت 2 سال یا در -80 درجه سانتیگراد برای نگهداری طولانی مدت.
بدون سیگنال تقویتی
1. Taq DNA Polymerase موجود در کیت به دلیل نگهداری نامناسب یا انقضای کیت فعالیت خود را از دست می دهد.
توصیه: شرایط نگهداری کیت را تأیید کنید.مقدار مناسبی از Taq DNA Polymerase را مجدداً به سیستم PCR اضافه کنید یا یک کیت Real Time PCR جدید برای آزمایش‌های مرتبط خریداری کنید.
2. تعداد زیادی مهارکننده Taq DNA Polymerase در قالب DNA وجود دارد.
پیشنهاد: قالب را مجدداً خالص کنید یا مقدار الگوی استفاده شده را کاهش دهید.
3. غلظت Mg2+ مناسب نیست.
توصیه: غلظت Mg2+ مخلوط 2× Real PCR که ما ارائه می کنیم 3.5 میلی مولار است.با این حال، برای برخی از پرایمرها و الگوهای خاص، غلظت Mg2+ ممکن است بیشتر باشد.بنابراین، می توانید مستقیماً MgCl2 را برای بهینه سازی غلظت Mg2+ اضافه کنید.برای بهینه سازی توصیه می شود هر بار Mg2+ 0.5mM را افزایش دهید.
4. شرایط تقویت PCR مناسب نیست و توالی پرایمر یا غلظت نامناسب است.
پیشنهاد: صحت دنباله پرایمر را تایید کنید و پرایمر تخریب نشده است.اگر سیگنال تقویت خوب نیست، سعی کنید دمای بازپخت را کاهش دهید و غلظت پرایمر را به طور مناسب تنظیم کنید.
5. مقدار قالب خیلی کم یا خیلی زیاد است.
توصیه: رقت شیب خطی سازی الگو را انجام دهید و غلظت الگو را با بهترین اثر PCR برای آزمایش Real Time PCR انتخاب کنید.
NTC ارزش فلورسانس بسیار بالایی دارد
1. آلودگی معرف ناشی از عملیات.
توصیه: برای آزمایش Real Time PCR با معرف های جدید جایگزین کنید.
2. آلودگی در طول آماده سازی سیستم واکنش PCR رخ داده است.
توصیه: اقدامات حفاظتی لازم را در حین کار انجام دهید، مانند: پوشیدن دستکش لاتکس، استفاده از نوک پیپت با فیلتر و غیره.
3. پرایمرها تخریب می شوند و تخریب پرایمرها باعث تقویت غیر اختصاصی می شود.
پیشنهاد: از الکتروفورز SDS-PAGE برای تشخیص تخریب شدن پرایمرها استفاده کنید و آنها را با پرایمرهای جدید برای آزمایش Real Time PCR جایگزین کنید.
دایمر پرایمر یا تقویت غیر اختصاصی
1. غلظت Mg2+ مناسب نیست.
توصیه: غلظت Mg2+ مخلوط 2× Real PCR EasyTM که ما ارائه می کنیم 3.5 میلی مولار است.با این حال، برای برخی از پرایمرها و الگوهای خاص، غلظت Mg2+ ممکن است بیشتر باشد.بنابراین، می توانید مستقیماً MgCl2 را برای بهینه سازی غلظت Mg2+ اضافه کنید.برای بهینه سازی توصیه می شود هر بار Mg2+ 0.5mM را افزایش دهید.
2. دمای آنیل PCR بسیار پایین است.
پیشنهاد: هر بار دمای بازپخت PCR را 1 درجه یا 2 درجه افزایش دهید.
3. محصول PCR خیلی طولانی است.
توصیه: طول محصول Real Time PCR باید بین 100-150bp باشد، نه بیشتر از 500bp.
4. پرایمرها تخریب می شوند و تخریب پرایمرها منجر به ظهور یک تقویت خاص می شود.
پیشنهاد: از الکتروفورز SDS-PAGE برای تشخیص تخریب شدن پرایمرها استفاده کنید و آنها را با پرایمرهای جدید برای آزمایش Real Time PCR جایگزین کنید.
5. سیستم PCR نامناسب است یا سیستم خیلی کوچک است.
پیشنهاد: سیستم واکنش PCR بسیار کوچک است که باعث کاهش دقت تشخیص می شود.بهتر است از سیستم واکنش توصیه شده توسط ابزار کمی PCR برای اجرای مجدد آزمایش Real Time PCR استفاده شود.
تکرارپذیری ضعیف مقادیر کمی
1. ابزار خراب است.
پیشنهاد: ممکن است بین هر سوراخ PCR دستگاه خطاهایی وجود داشته باشد که منجر به تکرارپذیری ضعیف در طول مدیریت یا تشخیص دما می شود.لطفاً طبق دستورالعمل دستگاه مربوطه بررسی کنید.
2. خلوص نمونه خوب نیست.
توصیه: نمونه های ناخالص منجر به تکرارپذیری ضعیف آزمایش می شود که شامل خلوص الگو و پرایمرها می شود.بهتر است قالب را مجدداً خالص سازی کنید و پرایمرها به بهترین وجه توسط SDS-PAGE خالص سازی می شوند.
3. زمان آماده سازی و ذخیره سازی سیستم PCR بسیار طولانی است.
پیشنهاد: بلافاصله پس از آماده سازی از سیستم Real Time PCR برای آزمایش PCR استفاده کنید و آن را برای مدت طولانی کنار نگذارید.
4. شرایط تقویت PCR مناسب نیست و توالی پرایمر یا غلظت نامناسب است.
پیشنهاد: صحت دنباله پرایمر را تایید کنید و پرایمر تخریب نشده است.اگر سیگنال تقویت خوب نیست، سعی کنید دمای بازپخت را کاهش دهید و غلظت پرایمر را به طور مناسب تنظیم کنید.
5. سیستم PCR نامناسب است یا سیستم خیلی کوچک است.
پیشنهاد: سیستم واکنش PCR بسیار کوچک است که باعث کاهش دقت تشخیص می شود.بهتر است از سیستم واکنش توصیه شده توسط ابزار کمی PCR برای اجرای مجدد آزمایش Real Time PCR استفاده شود.
