Foreasy Taq DNA Polymerase
توضیحات کیت:
◮ویژگی بالا: آنزیم دارای فعالیت شروع گرم خاصی است.
◮تقویت سریع: 10 ثانیه در کیلوبایت
◮الگوی بسیار سازگار: می تواند برای تقویت موثر GC با ارزش بالا، الگوهای مختلف DNA با سختی تقویت استفاده شود.
◮وفاداری قوی: آنزیم Taq معمولی 6 بار.
◮پایداری حرارتی قوی: می توان آن را به مدت یک هفته در دمای 37 درجه سانتی گراد قرار داد و بیش از 90 درصد فعالیت را حفظ می کند.
شرح
Foreasy Taq DNA Polymerase یک آنزیم Taq جدید است که در باکتری های مهندسی اشریشیا کلی با فناوری نوترکیبی ژن بیان می شود.خود آنزیم دارای فعالیت شروع گرم خاصی است و می تواند برای PCR معمولی و qPCR استفاده شود.دارای فعالیت DNA پلیمراز 5'→3' و فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' است، اما فعالیت اگزونوکلئاز 3'→5' ندارد.
اجزای کیت
| جزء | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Foreasy Taq DNA Polymerase(5 U/μL) | 5000 U (1 میلی لیتر) | 50 KU (10 میلی لیتر) | 500 KU (100 میلی لیتر) |
| 2× بافر واکنش Taq | 25 میلی لیتر × 5 | 250 میلی لیتر × 5 | 500 میلی لیتر × 25 |
ویژگی ها و مزایا
- ویژگی بالا: آنزیم دارای فعالیت شروع گرم خاصی است.
- تقویت سریع: 10 ثانیه در کیلوبایت
- الگوی بسیار سازگار: می تواند برای تقویت موثر GC با ارزش بالا، الگوهای مختلف DNA با سختی تقویت استفاده شود.
- وفاداری قوی: آنزیم Taq معمولی 6 بار.
- پایداری حرارتی قوی: می توان آن را در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت یک هفته قرار داد و بیش از 90 درصد فعالیت را حفظ کرد.
اپلیکیشن کیت
سیستم های مختلف PCR/qPCR و سیستم های مستقیم PCR
تکثیر PCR قطعات DNA
برچسب گذاری DNA
توالی یابی DNA
PCR A-tailed
تعریف U
1U: مقدار آنزیم مورد نیاز برای ترکیب 10 نانومول از دئوکسی نوکلئوتیدها در مواد نامحلول در اسید با استفاده از DNA اسپرم فعال شده ماهی آزاد به عنوان الگو/پرایمر به مدت 30 دقیقه در دمای 74 درجه سانتی گراد.
شرایط واکنش
| درجه حرارت | زمان | چرخه |
| 37 درجه سانتی گراد | 5 دقیقه | 1 |
| 94 درجه سانتی گراد | 5 دقیقه | 1 |
| 94 درجه سانتی گراد | 10 ثانیه | 35 |
| 60 درجه سانتی گراد | 10 ثانیه | |
| 72 درجه سانتی گراد | 20 ثانیه در کیلوبایت | |
| 72 درجه سانتی گراد | 2 دقیقه | 1 |
ذخیره سازی
-20 ± 5 درجه سانتیگراد به مدت 2 سال یا در -80 درجه سانتیگراد برای نگهداری طولانی مدت.
بدون سیگنال تقویتی
1. Taq DNA Polymerase موجود در کیت به دلیل نگهداری نامناسب یا انقضای کیت فعالیت خود را از دست می دهد.
توصیه: شرایط نگهداری کیت را تأیید کنید.مقدار مناسبی از Taq DNA Polymerase را مجدداً به سیستم PCR اضافه کنید یا یک کیت Real Time PCR جدید برای آزمایش‌های مرتبط خریداری کنید.
2. تعداد زیادی مهارکننده Taq DNA Polymerase در قالب DNA وجود دارد.
پیشنهاد: قالب را مجدداً خالص کنید یا مقدار الگوی استفاده شده را کاهش دهید.
3. غلظت Mg2+ مناسب نیست.
توصیه: غلظت Mg2+ مخلوط 2× Real PCR که ما ارائه می کنیم 3.5 میلی مولار است.با این حال، برای برخی از پرایمرها و الگوهای خاص، غلظت Mg2+ ممکن است بیشتر باشد.بنابراین، می توانید مستقیماً MgCl2 را برای بهینه سازی غلظت Mg2+ اضافه کنید.برای بهینه سازی توصیه می شود هر بار Mg2+ 0.5mM را افزایش دهید.
4. شرایط تقویت PCR مناسب نیست و توالی پرایمر یا غلظت نامناسب است.
پیشنهاد: صحت دنباله پرایمر را تایید کنید و پرایمر تخریب نشده است.اگر سیگنال تقویت خوب نیست، سعی کنید دمای بازپخت را کاهش دهید و غلظت پرایمر را به طور مناسب تنظیم کنید.
5. مقدار قالب خیلی کم یا خیلی زیاد است.
توصیه: رقت شیب خطی سازی الگو را انجام دهید و غلظت الگو را با بهترین اثر PCR برای آزمایش Real Time PCR انتخاب کنید.
NTC ارزش فلورسانس بسیار بالایی دارد
1. آلودگی معرف ناشی از عملیات.
توصیه: برای آزمایش Real Time PCR با معرف های جدید جایگزین کنید.
2. آلودگی در طول آماده سازی سیستم واکنش PCR رخ داده است.
توصیه: اقدامات حفاظتی لازم را در حین کار انجام دهید، مانند: پوشیدن دستکش لاتکس، استفاده از نوک پیپت با فیلتر و غیره.
3. پرایمرها تخریب می شوند و تخریب پرایمرها باعث تقویت غیر اختصاصی می شود.
پیشنهاد: از الکتروفورز SDS-PAGE برای تشخیص تخریب شدن پرایمرها استفاده کنید و آنها را با پرایمرهای جدید برای آزمایش Real Time PCR جایگزین کنید.
دایمر پرایمر یا تقویت غیر اختصاصی
1. غلظت Mg2+ مناسب نیست.
توصیه: غلظت Mg2+ مخلوط 2× Real PCR EasyTM که ما ارائه می کنیم 3.5 میلی مولار است.با این حال، برای برخی از پرایمرها و الگوهای خاص، غلظت Mg2+ ممکن است بیشتر باشد.بنابراین، می توانید مستقیماً MgCl2 را برای بهینه سازی غلظت Mg2+ اضافه کنید.برای بهینه سازی توصیه می شود هر بار Mg2+ 0.5mM را افزایش دهید.
2. دمای آنیل PCR بسیار پایین است.
پیشنهاد: هر بار دمای بازپخت PCR را 1 درجه یا 2 درجه افزایش دهید.
3. محصول PCR خیلی طولانی است.
توصیه: طول محصول Real Time PCR باید بین 100-150bp باشد، نه بیشتر از 500bp.
4. پرایمرها تخریب می شوند و تخریب پرایمرها منجر به ظهور یک تقویت خاص می شود.
پیشنهاد: از الکتروفورز SDS-PAGE برای تشخیص تخریب شدن پرایمرها استفاده کنید و آنها را با پرایمرهای جدید برای آزمایش Real Time PCR جایگزین کنید.
5. سیستم PCR نامناسب است یا سیستم خیلی کوچک است.
پیشنهاد: سیستم واکنش PCR بسیار کوچک است که باعث کاهش دقت تشخیص می شود.بهتر است از سیستم واکنش توصیه شده توسط ابزار کمی PCR برای اجرای مجدد آزمایش Real Time PCR استفاده شود.
تکرارپذیری ضعیف مقادیر کمی
1. ابزار خراب است.
پیشنهاد: ممکن است بین هر سوراخ PCR دستگاه خطاهایی وجود داشته باشد که منجر به تکرارپذیری ضعیف در طول مدیریت یا تشخیص دما می شود.لطفاً طبق دستورالعمل دستگاه مربوطه بررسی کنید.
2. خلوص نمونه خوب نیست.
توصیه: نمونه های ناخالص منجر به تکرارپذیری ضعیف آزمایش می شود که شامل خلوص الگو و پرایمرها می شود.بهتر است قالب را مجدداً خالص سازی کنید و پرایمرها به بهترین وجه توسط SDS-PAGE خالص سازی می شوند.
3. زمان آماده سازی و ذخیره سازی سیستم PCR بسیار طولانی است.
پیشنهاد: بلافاصله پس از آماده سازی از سیستم Real Time PCR برای آزمایش PCR استفاده کنید و آن را برای مدت طولانی کنار نگذارید.
4. شرایط تقویت PCR مناسب نیست و توالی پرایمر یا غلظت نامناسب است.
پیشنهاد: صحت دنباله پرایمر را تایید کنید و پرایمر تخریب نشده است.اگر سیگنال تقویت خوب نیست، سعی کنید دمای بازپخت را کاهش دهید و غلظت پرایمر را به طور مناسب تنظیم کنید.
5. سیستم PCR نامناسب است یا سیستم خیلی کوچک است.
پیشنهاد: سیستم واکنش PCR بسیار کوچک است که باعث کاهش دقت تشخیص می شود.بهتر است از سیستم واکنش توصیه شده توسط ابزار کمی PCR برای اجرای مجدد آزمایش Real Time PCR استفاده شود.
