Real Time PCR Easyᵀᴹ-Taqman
توضیحات کیت:
◮Simple—2× PCR Mix برای کاهش خطای آزمایشی و زمان عملیات
◮بافر اختصاصی بهینه و آنزیم Taq شروع داغ می تواند از تقویت غیر اختصاصی و تشکیل دایمر پرایمر جلوگیری کند.
◮حساسیت بالا - می تواند کپی های کم الگو را تشخیص دهد
◮تطبیق پذیری خوب - سازگار با اکثر ابزارهای کمی PCR در زمان واقعی
توضیحات کیت
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman ارائه شده توسط Real Time PCR EasyTMکیت Taqman یک سیستم پیش مخلوط جدید است که از پروب های فلورسنت خاص برای واکنش های تقویت Real Time PCR استفاده می کند که می تواند ویژگی محصول و حساسیت واکنش را تا حد زیادی بهبود بخشد.ROX به عنوان رنگ کنترل داخلی ارائه می شود.
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman حاوی Taq DNA Polymerase منحصر به فرد Foregene است.در مقایسه با آنزیم های معمولی Taq، دارای مزایای راندمان تقویت بالا، توانایی تقویت خاص قوی و نرخ عدم تطابق کم است.می تواند تقویت غیر اختصاصی را کاهش دهد و دقت PCR را بهبود بخشد.
مشخصات فنی
| Real Time PCR آسانTM-تقمان | ||||
| ترکیب کیت (سیستم 20 میکرولیتر) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500 تن | 1000 تن | 2000T | |
| 2×PCR واقعیآسانTMمخلوط کردن-تقمان | 1 میلی لیتر ×2 | 1.7 میلی لیتر ×3 | 1.7 میلی لیتر ×6 | 1.7 میلی لیتر ×12 |
| 20×رنگ مرجع ROX | 200 میکرولیتر | 0.5ml | 1 میلی لیتر | 1 میلی لیتر × 2 |
| ddH بدون DNase2O | 1.7 میلی لیتر | 1.7 میلی لیتر ×2 | 10 میلی لیتر | 20 میلی لیتر |
| Iدستورالعمل | 1 | 1 | 1 | 1 |
ویژگی ها و مزایا
■ Simple—2X PCR Mix برای کاهش خطای آزمایشی و زمان عملیات
■ بافر اختصاصی بهینه شده و آنزیم Taq شروع داغ می تواند از تقویت غیر اختصاصی و تشکیل دایمر پرایمر جلوگیری کند.
■ حساسیت بالا — می تواند کپی های کم الگو را تشخیص دهد
■ تطبیق پذیری خوب - سازگار با اکثر ابزارهای کمی PCR در زمان واقعی
اپلیکیشن کیت
تجزیه و تحلیل qPCR
جریان کار
گرافیک
ذخیره سازی و ماندگاری
این کیت باید دور از نور و در دمای -20 درجه سانتیگراد نگهداری شود.در صورت استفاده مکرر، می توان آن را برای مدت کوتاهی (10 روز) در دمای 4 درجه سانتیگراد نیز نگهداری کرد.
بدون سیگنال تقویتی
1. Taq DNA Polymerase موجود در کیت به دلیل نگهداری نامناسب یا انقضای کیت فعالیت خود را از دست می دهد.
توصیه: شرایط نگهداری کیت را تأیید کنید.مقدار مناسبی از Taq DNA Polymerase را مجدداً به سیستم PCR اضافه کنید یا یک کیت Real Time PCR جدید برای آزمایش‌های مرتبط خریداری کنید.
2. تعداد زیادی مهارکننده Taq DNA Polymerase در قالب DNA وجود دارد.
پیشنهاد: قالب را مجدداً خالص کنید یا مقدار الگوی استفاده شده را کاهش دهید.
3. غلظت Mg2+ مناسب نیست.
توصیه: غلظت Mg2+ مخلوط 2× Real PCR که ما ارائه می کنیم 3.5 میلی مولار است.با این حال، برای برخی از پرایمرها و الگوهای خاص، غلظت Mg2+ ممکن است بیشتر باشد.بنابراین، می توانید مستقیماً MgCl2 را برای بهینه سازی غلظت Mg2+ اضافه کنید.برای بهینه سازی توصیه می شود هر بار Mg2+ 0.5mM را افزایش دهید.
4. شرایط تقویت PCR مناسب نیست و توالی پرایمر یا غلظت نامناسب است.
پیشنهاد: صحت دنباله پرایمر را تایید کنید و پرایمر تخریب نشده است.اگر سیگنال تقویت خوب نیست، سعی کنید دمای بازپخت را کاهش دهید و غلظت پرایمر را به طور مناسب تنظیم کنید.
5. مقدار قالب خیلی کم یا خیلی زیاد است.
توصیه: رقت شیب خطی سازی الگو را انجام دهید و غلظت الگو را با بهترین اثر PCR برای آزمایش Real Time PCR انتخاب کنید.
NTC ارزش فلورسانس بسیار بالایی دارد
1. آلودگی معرف ناشی از عملیات.
توصیه: برای آزمایش Real Time PCR با معرف های جدید جایگزین کنید.
2. آلودگی در طول آماده سازی سیستم واکنش PCR رخ داده است.
توصیه: اقدامات حفاظتی لازم را در حین کار انجام دهید، مانند: پوشیدن دستکش لاتکس، استفاده از نوک پیپت با فیلتر و غیره.
3. پرایمرها تخریب می شوند و تخریب پرایمرها باعث تقویت غیر اختصاصی می شود.
پیشنهاد: از الکتروفورز SDS-PAGE برای تشخیص تخریب شدن پرایمرها استفاده کنید و آنها را با پرایمرهای جدید برای آزمایش Real Time PCR جایگزین کنید.
دایمر پرایمر یا تقویت غیر اختصاصی
1. غلظت Mg2+ مناسب نیست.
توصیه: غلظت Mg2+ مخلوط 2× Real PCR EasyTM که ما ارائه می کنیم 3.5 میلی مولار است.با این حال، برای برخی از پرایمرها و الگوهای خاص، غلظت Mg2+ ممکن است بیشتر باشد.بنابراین، می توانید مستقیماً MgCl2 را برای بهینه سازی غلظت Mg2+ اضافه کنید.برای بهینه سازی توصیه می شود هر بار Mg2+ 0.5mM را افزایش دهید.
2. دمای آنیل PCR بسیار پایین است.
پیشنهاد: هر بار دمای بازپخت PCR را 1 درجه یا 2 درجه افزایش دهید.
3. محصول PCR خیلی طولانی است.
توصیه: طول محصول Real Time PCR باید بین 100-150bp باشد، نه بیشتر از 500bp.
4. پرایمرها تخریب می شوند و تخریب پرایمرها منجر به ظهور یک تقویت خاص می شود.
پیشنهاد: از الکتروفورز SDS-PAGE برای تشخیص تخریب شدن پرایمرها استفاده کنید و آنها را با پرایمرهای جدید برای آزمایش Real Time PCR جایگزین کنید.
5. سیستم PCR نامناسب است یا سیستم خیلی کوچک است.
پیشنهاد: سیستم واکنش PCR بسیار کوچک است که باعث کاهش دقت تشخیص می شود.بهتر است از سیستم واکنش توصیه شده توسط ابزار کمی PCR برای اجرای مجدد آزمایش Real Time PCR استفاده شود.
تکرارپذیری ضعیف مقادیر کمی
1. ابزار خراب است.
پیشنهاد: ممکن است بین هر سوراخ PCR دستگاه خطاهایی وجود داشته باشد که منجر به تکرارپذیری ضعیف در طول مدیریت یا تشخیص دما می شود.لطفاً طبق دستورالعمل دستگاه مربوطه بررسی کنید.
2. خلوص نمونه خوب نیست.
توصیه: نمونه های ناخالص منجر به تکرارپذیری ضعیف آزمایش می شود که شامل خلوص الگو و پرایمرها می شود.بهتر است قالب را مجدداً خالص سازی کنید و پرایمرها به بهترین وجه توسط SDS-PAGE خالص سازی می شوند.
3. زمان آماده سازی و ذخیره سازی سیستم PCR بسیار طولانی است.
پیشنهاد: بلافاصله پس از آماده سازی از سیستم Real Time PCR برای آزمایش PCR استفاده کنید و آن را برای مدت طولانی کنار نگذارید.
4. شرایط تقویت PCR مناسب نیست و توالی پرایمر یا غلظت نامناسب است.
پیشنهاد: صحت دنباله پرایمر را تایید کنید و پرایمر تخریب نشده است.اگر سیگنال تقویت خوب نیست، سعی کنید دمای بازپخت را کاهش دهید و غلظت پرایمر را به طور مناسب تنظیم کنید.
5. سیستم PCR نامناسب است یا سیستم خیلی کوچک است.
پیشنهاد: سیستم واکنش PCR بسیار کوچک است که باعث کاهش دقت تشخیص می شود.بهتر است از سیستم واکنش توصیه شده توسط ابزار کمی PCR برای اجرای مجدد آزمایش Real Time PCR استفاده شود.
