کیت QuickEasy Cell Direct RT-qPCR (96 چاه) – SYBR Green I
توضیحات
این(96 چاه) QuickEasyTM کیت Cell Direct RT-qPCR–SYBR گرین Iفراهم می کندیک سیستم بافر لیز منحصر به فردto به سرعت RNA را آزاد می کنداز سلول کشت شدهنمونه‌هایی برای واکنش‌های RT-qPCR، حذف زمان‌بر و پر زحمتفرآیند خالص سازی RNA، و تنها 7 دقیقه طول می کشد تا الگوی RNA مورد نیاز به دست آید.این5× میکس مستقیم RTو2× مستقیم qPCR Mix-SYBRارائه شده در جعبه می تواند به سرعت وبه طور موثر مقدار کمی را در زمان واقعی بدست آوریدنتایج PCR
5× Direct RT Mix و 2× Direct qPCR Mix-SYBR دارای تحمل بازدارنده قوی هستند و می توانند از لیز نمونه برای آزمایش به عنوان یک الگو برای رونویسی معکوس کارآمد و تقویت خاص استفاده کنند.این معرف حاوی ترانس کریپتاز معکوس منحصر به فرد Foregene با میل ترکیبی بالا برای RNA، و همچنین Hot D-Taq DNA Polymerase، dNTPs، MgCl است.2 بافر واکنش، بهینه ساز و تثبیت کننده PCR، و می تواند همراه با بافر لیز برای تشخیص سریع، آسان و دقیق نمونه استفاده شود و دارای ویژگی های حساسیت بالا، ویژگی قوی و پایداری خوب است.
این کیت با هدف لیز میکروسیستم سلول های کشت شده با 96 چاهک طراحی شده است و یکنواختی و قوام خوبی دارد.اجزای کیت 96 واکنش لیز، 96 واکنش رونویسی معکوس و واکنش qPCR 96×2 را ارائه می‌دهند که می‌توانند صفحه سلول‌های 96 چاهی را برای یک بار استفاده برآورده کنند و از آلودگی ناشی از باز کردن، انجماد و ذوب مکرر معرف‌ها و تخریب عملکرد معرف جلوگیری کنند.
اجزای کیت
| ترکیب کیت ( 50 μسیستم لیز L/20 میکرولیترRT سیستم واکنش /20μسیستم واکنش L qPCR) | DRT-03011 | تذکر دهید | |
| 96T | |||
| قسمتI | بافرCL | 5 میلی لیتر | سلوللیز |
| فورجینپروتئاز پلاس II | 100 μL | ||
| بافرST | 500 μL | ||
| قسمت II | DNAپاک کن | 100 μL | |
| 5× میکس مستقیم RT | 400 μL | RT | |
| 2× مخلوط مستقیم qPCR-SYBR | 1 مترL × 2 | qPCR | |
| رنگ مرجع 50× ROX | 400µL | ||
| RNase- رایگانddH2 O | 1.7 میلی لیتر |
| |
| Mسالانه | 1 قطعه | 1 سروینگ | |
*: پاک کن DNA معرف لیز در قسمت دوم کیت موجود است.اجزای سلول Lysis، RT و qPCR را می توان به طور جداگانه خریداری کرد.
ویژگی ها و مزایا
■ساده و موثر: با فناوری Cell Direct RT، نمونه های RNA را می توان تنها در 7 دقیقه به دست آورد.
■ تقاضای نمونه کم است، تا 10 سلول را می توان آزمایش کرد.
■ توان عملیاتی بالا: می تواند به سرعت RNA را در سلول های کشت شده در صفحات 384، 96، 24، 12، 6 چاهی تشخیص دهد.
■ پاک‌کن DNA می‌تواند ژنوم‌های آزاد شده را به سرعت حذف کند و تأثیر آن بر نتایج آزمایشی بعدی را تا حد زیادی کاهش دهد.
■ سیستم RT و qPCR بهینه شده، رونویسی معکوس دو مرحله ای RT-PCR را کارآمدتر و PCR را خاص تر و در برابر مهارکننده های واکنش RT-qPCR مقاوم تر می کند.
اپلیکیشن کیت
دامنه کاربرد: سلول های کشت شده.
- RNA منتشر شده توسط لیز نمونه: فقط برای الگوی RT-qPCR این کیت قابل استفاده است.
- کیت را می توان برای اهداف زیر استفاده کرد: تجزیه و تحلیل بیان ژن، تأیید اثر خاموشی ژن با واسطه siRNA، غربالگری دارو و غیره.
ذخیره سازی و ماندگاری
قسمت اول این کیت باید در 4 ذخیره شود℃;قسمت دوم باید در دمای -20 درجه سانتیگراد ذخیره شود.
Foregene Protease Plus II باید در 4 ذخیره شود℃، در -20 درجه یخ نزنید.
معرف 2×مستقیم qPCR Mix-Taqman باید در -20 ذخیره شود℃در تاریکی؛در صورت استفاده مکرر، می توان آن را در 4 نیز ذخیره کرد℃ برای ذخیره سازی کوتاه مدت (در مدت 10 روز استفاده کنید).
اصول طراحی پرایمر Real Time PCR
پرایمر جلو و پرایمر معکوس
برای Real Time PCR، طراحی پرایمر بسیار مهم است.پرایمرها به ویژگی و کارایی تقویت PCR مربوط می شوند و می توانند با توجه به اصول زیر طراحی شوند:
- طول پرایمر: 18-30 جفت باز.
- محتوای GC: 40-60٪.
- مقدار Tm: نرم افزار طراحی پرایمر مانند Primer 5 می تواند مقدار Tm پرایمر را بدهد.مقادیر Tm پرایمرهای بالادست و پایین دست باید تا حد امکان نزدیک باشد.از فرمول محاسبه Tm نیز می توان استفاده کرد: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).هنگام انجام PCR، دمای کمتر از مقدار Tm پرایمر 5 درجه سانتیگراد به طور کلی به عنوان دمای بازپخت انتخاب می شود (افزایش متناظر در دمای آنیل می تواند ویژگی واکنش PCR را افزایش دهد).
- پرایمرها و محصولات PCR:
- طول محصول تقویت PCR پرایمر طراحی ترجیحاً 100-150 جفت باز است.
- تا حد امکان از پرایمرهای طراحی در ناحیه ساختاری ثانویه قالب اجتناب شود.
- از تشکیل 2 یا بیشتر پایه مکمل بین انتهای 3 پرایمرهای بالادست و پایین دست خودداری کنید.
- پایه پایانه پرایمر 3 نمی تواند با 3 G یا C متوالی اضافی وجود داشته باشد.
- خود پرایمرها نمی توانند ساختارهای مکمل داشته باشند، در غیر این صورت یک ساختار سنجاق سر تشکیل می شود که بر تقویت PCR تأثیر می گذارد.
- ATCG باید تا حد امکان به طور یکنواخت در توالی پرایمر توزیع شود و از پایه ترمینال 3 به عنوان T اجتناب شود.
ضمیمه1: Cell مستقیمRT-qPCR کیت کامپوننتبسته مکمل t
1. محلول لیز سلولی
| محلول لیز سلولی | |||
| اجزای کیت (سیستم لیز 24 چاهی / چاه) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ت | 500 ت | ||
| قسمتمن | بافر CL | 20 میلی لیتر | 100 میلی لیتر |
| Foregene Protease Plus II | 400 میکرولیتر | 1 میلی لیتر × 2 | |
| بافر ST | 1 میلی لیتر × 2 | 10 میلی لیتر | |
| قسمتII | پاک کن DNA | 400 میکرولیتر | 1 میلی لیتر × 2 |
| RT میکس | |
| اجزای کیت (سیستم واکنش ۲۰ میکرولیتری) | DRT-01011-B1 |
| 200 ت | |
| 5× میکس مستقیم RT | 800 میکرولیتر |
| ddH بدون RNase2O | 1.7 میلی لیتر × 2 |
| مخلوط qPCR | ||
| اجزای کیت (سیستم واکنش ۲۰ میکرولیتری) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ت | 1000 ت | |
| 2× مستقیم qPCR Mix-Taqman | 1 میلی لیتر × 2 | 1.7 میلی لیتر × 6 |
| 20× رنگ مرجع ROX | 40 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| ddH بدون RNase2O | 1.7 میلی لیتر | 10 میلی لیتر |
دفترچه راهنما:
