کیت qPCR RT مستقیم سلولی — پروب کیت های QRT-PCR یک مرحله ای آماده سلول لیزی سلولی Taqman
توضیحات
این محصول از یک سیستم بافر لیز منحصربه‌فرد برای آزادسازی سریع RNA از نمونه‌های سلولی کشت‌شده برای واکنش‌های RT-qPCR استفاده می‌کند، فرآیند تصفیه RNA زمان‌بر و پر زحمت را حذف می‌کند و تنها 7 دقیقه برای به دست آوردن الگوی RNA مورد نیاز، با مخلوط 5× Direct RT، 2× Direct qPCR Mix-Taqman می‌تواند به سرعت و به‌طور واقعی نتایج کمی را به دست آورد.
5× Direct RT Mix و 2× Direct qPCR Mix-Taqman دارای تحمل بازدارنده قوی هستند و می توانند با استفاده از لیز نمونه اندازه گیری شده به عنوان یک الگو، برگشت کارآمد و تقویت خاص را انجام دهند.این معرف حاوی ترانس کریپتاز معکوس Foregene، DNA پلیمراز داغ D-Taq، dNTPs، MgCl است.2بافر واکنش، بهینه ساز PCR و تثبیت کننده، که می تواند با بافر لیز برای تشخیص سریع و آسان نمونه ها استفاده شود و دارای ویژگی های حساسیت، ویژگی و پایداری بالا است.
مشخصات فنی
200×20μl Rxns، 1000×20μl Rxns
اجزای کیت
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| اجزای کیت سیستم واکنش qPCR 20μl | DRT-01021 | DRT-01022 | توجه داشته باشید | |
| 200 ت | 1000 ت | |||
|
قسمت I | بافر CL | 4 میلی لیتر | 20 میلی لیتر | لیز سلولی |
| Foregene Protease Plus II | 80 میکرولیتر | 400 میکرولیتر | ||
| بافر ST | 400 میکرولیتر | 1 میلی لیتر × 2 | ||
|
قسمت II | پاک کن DNA | 80 میکرولیتر | 400 میکرولیتر | |
| 5× میکس مستقیم RT * | 160 میکرولیتر | 800 میکرولیتر | RT | |
| 2× مستقیم qPCR Mix-Taqman * | 1 میلی لیتر × 2 | 1.7 میلی لیتر × 6 | qPCR | |
| رنگ مرجع 20×ROX | 40 میکرولیتر | 200 میکرولیتر | ||
| ddH بدون RNase2O | 1.7 میلی لیتر | 10 میلی لیتر | ||
| کتابچه راهنمای دستور العمل | 1 قطعه | 1 قطعه | ||
*:Cell Lysis، 5× Direct RT Mix، 2× Direct qPCR Mix-Taqman را می توان به صورت جداگانه خریداری کرد.
ویژگی ها و مزایا
■ساده و موثر: با فناوری Cell Direct RT، نمونه های RNA را می توان تنها در 7 دقیقه به دست آورد.
■ تقاضای نمونه کم است، تا 10 سلول را می توان آزمایش کرد.
■ توان عملیاتی بالا: می تواند به سرعت RNA را در سلول های کشت شده در صفحات 384، 96، 24، 12، 6 چاهی تشخیص دهد.
■ پاک‌کن DNA می‌تواند ژنوم‌های آزاد شده را به سرعت حذف کند و تأثیر آن بر نتایج آزمایشی بعدی را تا حد زیادی کاهش دهد.
■ سیستم RT و qPCR بهینه شده، رونویسی معکوس دو مرحله ای RT-PCR را کارآمدتر و PCR را خاص تر و در برابر مهارکننده های واکنش RT-qPCR مقاوم تر می کند.
اپلیکیشن کیت
دامنه کاربرد: سلول های کشت شده.
- RNA منتشر شده توسط لیز نمونه: فقط برای الگوی RT-qPCR این کیت قابل استفاده است.
- کیت را می توان برای اهداف زیر استفاده کرد: تجزیه و تحلیل بیان ژن، تأیید اثر خاموشی ژن با واسطه siRNA، غربالگری دارو و غیره.
ذخیره سازی و ماندگاری
قسمت اول این کیت باید در 4 ذخیره شود℃;قسمت دوم باید در دمای -20 درجه سانتیگراد ذخیره شود.
Foregene Protease Plus II باید در 4 ذخیره شود℃، در -20 درجه یخ نزنید.
معرف 2×مستقیم qPCR Mix-Taqman باید در -20 ذخیره شود℃در تاریکی؛در صورت استفاده مکرر، می توان آن را در 4 نیز ذخیره کرد℃ برای ذخیره سازی کوتاه مدت (در مدت 10 روز استفاده کنید).
اصول طراحی پرایمر Real Time PCR
پرایمر جلو و پرایمر معکوس
برای Real Time PCR، طراحی پرایمر بسیار مهم است.پرایمرها به ویژگی و کارایی تقویت PCR مربوط می شوند و می توانند با توجه به اصول زیر طراحی شوند:
- طول پرایمر: 18-30 جفت باز.
- محتوای GC: 40-60٪.
- مقدار Tm: نرم افزار طراحی پرایمر مانند Primer 5 می تواند مقدار Tm پرایمر را بدهد.مقادیر Tm پرایمرهای بالادست و پایین دست باید تا حد امکان نزدیک باشد.از فرمول محاسبه Tm نیز می توان استفاده کرد: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).هنگام انجام PCR، دمای کمتر از مقدار Tm پرایمر 5 درجه سانتیگراد به طور کلی به عنوان دمای بازپخت انتخاب می شود (افزایش متناظر در دمای آنیل می تواند ویژگی واکنش PCR را افزایش دهد).
- پرایمرها و محصولات PCR:
- طول محصول تقویت PCR پرایمر طراحی ترجیحاً 100-150 جفت باز است.
- تا حد امکان از پرایمرهای طراحی در ناحیه ساختاری ثانویه قالب اجتناب شود.
- از تشکیل 2 یا بیشتر پایه مکمل بین انتهای 3 پرایمرهای بالادست و پایین دست خودداری کنید.
- پایه پایانه پرایمر 3 نمی تواند با 3 G یا C متوالی اضافی وجود داشته باشد.
- خود پرایمرها نمی توانند ساختارهای مکمل داشته باشند، در غیر این صورت یک ساختار سنجاق سر تشکیل می شود که بر تقویت PCR تأثیر می گذارد.
- ATCG باید تا حد امکان به طور یکنواخت در توالی پرایمر توزیع شود و از پایه ترمینال 3 به عنوان T اجتناب شود.
ضمیمه1: Cell مستقیمRT-qPCR کیت کامپوننتبسته مکمل t
1. محلول لیز سلولی
| محلول لیز سلولی | |||
| اجزای کیت (سیستم لیز 24 چاهی / چاه) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ت | 500 ت | ||
| قسمتمن | بافر CL | 20 میلی لیتر | 100 میلی لیتر |
| Foregene Protease Plus II | 400 میکرولیتر | 1 میلی لیتر × 2 | |
| بافر ST | 1 میلی لیتر × 2 | 10 میلی لیتر | |
| قسمتII | پاک کن DNA | 400 میکرولیتر | 1 میلی لیتر × 2 |
| RT میکس | |
| اجزای کیت (سیستم واکنش ۲۰ میکرولیتری) | DRT-01011-B1 |
| 200 ت | |
| 5× میکس مستقیم RT | 800 میکرولیتر |
| ddH بدون RNase2O | 1.7 میلی لیتر × 2 |
| مخلوط qPCR | ||
| اجزای کیت (سیستم واکنش ۲۰ میکرولیتری) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ت | 1000 ت | |
| 2× مستقیم qPCR Mix-Taqman | 1 میلی لیتر × 2 | 1.7 میلی لیتر × 6 |
| 20× رنگ مرجع ROX | 40 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| ddH بدون RNase2O | 1.7 میلی لیتر | 10 میلی لیتر |
دفترچه راهنما:
