کیت II مستقیم RT-qPCR
توضیحات کیت:
◮کیت مستقیم RT-qPCR با استفاده از Foreasy Reverse Transcriptase و Foreasy HS Taq DNA Polymerase توسعه یافته توسط Foregene، با بافر واکنش منحصر به فرد، این کیت را با مقاومت و سازگاری قوی می سازد و می تواند مستقیماً واکنش را با استفاده از سیستم Foregene Lysis به عنوان الگو آزمایش کند.این کیت می تواند برای توسعه کیت تشخیص اسید نوکلئیک COVID-19 و سایر باکتری های بیماری زا کیت تشخیص اسید نوکلئیک استفاده شود.
شرح
کیت مستقیم RT-qPCR بسته بندی جداگانه بافر RT-qPCR، Foreasy HS Taq DNA Polymerase را ارائه می دهد.و Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV)،این کار را برای ایجاد کیت‌های بک‌اند و تنظیم سیستم، با تأیید ساده، راحت می‌کند.
کیت مستقیم RT-qPCR با استفاده از Foreasy Reverse Transcriptase و Foreasy HS Taq DNA Polymerase توسعه یافته توسط Foregene، با بافر واکنش منحصر به فرد، این کیت را با مقاومت و سازگاری قوی می سازد و می تواند مستقیماً واکنش را با استفاده از سیستم Foregene Lysis به عنوان الگو آزمایش کند.این کیت می تواند برای توسعه کیت تشخیص اسید نوکلئیک COVID-19 و سایر باکتری های بیماری زا کیت تشخیص اسید نوکلئیک استفاده شود.
این کیت می تواند مستقیماً جزء محصول IVD باشد، با استفاده آسان و سریع.فقط نیاز به تأیید آسان دارد، بدون اینکه دوباره توسعه یابد.
مشخصات فنی
500 تن، 50000 تن
اجزای کیت
| محتویات کیت (سیستم واکنش ۲۰ میکرولیتری) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 ت | 50000 ت | |
| Foreasy Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 میکرولیتر×1 | 1 میلی لیتر×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 100 میکرولیتر×1 | 1 میلی لیتر× 10 |
| 2× RT-qPCR مستقیمبافر | 1 میلی لیتر × 5 | 500 میلی لیتر × 1 |
| دستورالعمل | 1 | 1 |
مراحل عملیاتی
A: آماده سازی الگو و معرف
1. الگوی RNA آماده (توصیه می شود از کیت سری Foregene Total RNA Isolation Kit برای استخراج و خالص سازی قالب RNA استفاده شود) یا محصول ترک نمونه (توصیه می شود از سیستم Foregene Lysis استفاده شود)، پرایمرهای خاص (10 میکرومولار) و سایر مواد مصرفی مربوطه، ابزار.
2. بافر 2× Direct RT-qPCR، RNase-Free ddH2O و 20× ROX Reference Dye (در صورت نیاز) را در جعبه حاوی یخ قرار دهید تا به طور طبیعی ذوب شوند و به آرامی مخلوط شوند.
ب: سیستم RT-qPCR را آماده کنید
نصف حجم بافر واکنش سیستم واکنش را بدست آورید (مثلاً اگر حجم سیستم 20 میکرولیتر باشد، باید 10 میکرولیتر 2× مستقیم RT-qPCR بافر دریافت کند.). برایمقدار مربوط به آنزیم، ما این را پیشنهاد می کنیمM-MLV: سیستم واکنش 10-30 U/20 میکرولیتر,طاقDNA پلیمراز：سیستم واکنش 1-2 U/20 میکرولیتراین پیشنهاد ما است، شما باید آن را تست و تنظیم کنید، الگوی RNA، پرایمرها و پروب های خاص را اضافه کنید و ddH بدون RNase اضافه کنید.2O تا 20 میکرولیترآماده سازی خاص سیستم واکنش RT-qPCR را می توان به جدول 1 زیر اشاره کرد.
جدول 1: سیستم RT-qPCR را آماده کنید
| جزء | جلد | غلظت نهایی |
| 2× بافر مستقیم RT-qPCR | 10 میکرولیتر | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| پرایمر جلو (10 میکرومولار) | 0.8 میکرولیتر | 50-900 نانومتر |
| پرایمر معکوس (10 میکرومولار) | 0.8 میکرولیتر | 50-900 نانومتر |
| پروب (4 میکرومولار) | 1 میکرولیتر | 200 نانومتر |
| الگو (RNA یا Lysate) | X μL | |
| 20× رنگ مرجع ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) میکرولیتر | |
| حجم کل | 20 میکرولیتر |
نکته: Forward Primer و Reverse Primer پرایمرهای اختصاصی ژن هدف هستند.سیستم qPCR را می توان با توجه به مدل های تجربی و PCR عملی تنظیم کرد.ما 400nM را برای غلظت نهایی بیشتر پرایمرها توصیه می کنیم.لطفا حجم پرایمرها و پروب های خاص را با توجه به غلظت آماده شده و غلظت نهایی توصیه شده تنظیم کنید.
1*: غلظت نهایی مناسب رنگ مرجع ROX را با توجه به ابزارهای مختلف PCR کمی انتخاب کنید.غلظت بهینه رنگ مرجع ROX در ابزارهای رایج کمی PCR در جدول زیر نشان داده شده است:
| ابزار کمی PCR | غلظت نهایی رنگ مرجع ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/گام اول،و غیره. | 1× (به عنوان مثال، 1μl 20×ROX Reference Dye را در سیستم واکنش 20 میکرولیتری اضافه کنید) |
| ABI 7500، 7500 Fast، Stratagene Mx3000P، Mx3005P و Mx4000 و غیره. | 0.5× (به عنوان مثال، 0.5μl 20×ROX Reference Dye را در سیستم واکنش 20 میکرولیتری اضافه کنید) |
| ابزار Roche PCR، ابزار Bio-Rad PCR، ابزار PCR کمی اپندورف و غیره. | بدون رنگ مرجع ROX |
ذخیره سازی و ماندگاری
کیت باید در دمای -20 ± ℃ نگهداری شود.باید فوراً در یخچال ترموستاتیک -20 درجه سانتیگراد نگهداری شود.مدت اعتبار در صورت نگهداری در شرایط مناسب 2 سال است.
